rpha法检测hbsag应注意几个问题

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1、RPHA法检测HBsAg应注意几个问题杨雪梅(黑龙江省哈尔滨市第十医院黑龙江哈尔滨150070)【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)11-0212-01【关键词】RPHA法HbsAg检测HbsAg是乙肝病毒感染的最重要病原标志和直接证据之一。对HBsAg的血清进行有效的检测，具有十分重要的临床和流行病学意义。采用RPHA法检测HBsAgo此法操作方便，稀释速度快，固定容量、灵敏度高，同时此法也存在一些缺点和问题，容易忽视。通过工作实践总结以下几点经验。谨供参考。1稀释棒的问题1.1

2、稀释棒是用来取液、传液和混合液体的。因此首先稀释棒的吸液量要准确。高者达0.04克水。低者为0.00067克水。所以使用前最好用试纸法测定它的吸液量。1.2用前应检查稀释棒内有无杂物。棒内丝状物是由于少量蛋白质没有洗掉，加热后凝集在棒孔内的。可用2%HCA浸泡效果良好，但应只将棒头侵入为宜，因棒头为合金钢，不被稀HCA腐蚀而棒杆为铝质易腐蚀，浸泡3〜5小时后用水冲洗干净即可。1.3用前稀释棒要予温。然后用吸水纸吸去头部的水甩干备用，只有微湿条件下，棒头才能吸满血清，达到衡定标准。1.4蘸血清位置应统一液面到金属头端与颈部交界

3、处，不可深埋，否则吸液量过多。最好将棒上下蘸液几次。这样吸液量才能稳定，并应检查棒的尖端缝隙中确无空气。1.5搓棒速度要均匀一致2〜3次/秒，防止血清溅到其它孔中。孔中应无气泡.如有气泡用针头挑出，否则影响结果的观察。1.6棒的消毒最好用煮沸法，如用火焰烧灼消毒在烧灼10次后，吸量会有不同程度的改变，吸.量奋所提高，这可能是由于金属头部的缝隙由于烧灼氧化而扩大引起的。因此烧灼法虽可以彻底消毒，但影响棒的精确度。1.7用稀释棒稀释的结果均比用滴管稀释的滴度要低，一般低2〜3孔不等。有报道用稀释棒可有11.4%的阳性漏检。两种方

4、法测定结果的差异非常显著(X2=6.125P<0.001)。稀释棒法虽有快速易掌握的优点，但没有滴管稀释准确。2反应板实际工作中常用的浸泡反应板的2%HCI和7M尿索，对HBsAg的抗原性无破坏作用，2%HCI起溶解RBC作用，7M尿索起清洁板的作用，所以此浸泡液一定要定期更换，防止污染引起假阳性。另外久用的反应板孔底可出现环状小沟槽，这是由于搓棒长期磨损的结果，这样的板可使RBC不能顺利的下沉于孔中央，加之搓棒磨下的有机玻璃小颗粒粘度大，比重亦大，这种颗粒沉于孔底较快，iL不易沉于中央，并阻挡RBC向孔中央沉淀作用，

5、使RBC平铺孔底造成假阳性。所以磨出沟槽的反应板应更换。3假阴、阳问题3.1奋报道，HBsAg阴性者的唾液标本用IRPHA法检测时，凝集效价可达1:4〜1:32不等，如将这些唾液加入HBsAg阴性的血清标本中可使后者效价达1:4〜1:32。因此实际工作中应避免唾液引起的假阳性。3.2溶血和黄疸的标本对结果无影响，乳糜血不但无假阳性，且RBC沉淀好，可作阴性对照。3.3阳性对照血清5天后RBC的沉淀不好，应定期更换阳性对照血清。3.4RPHA前滞现象的形成，可能是由于当血清HBsAg滴度高吋，RBC沉淀较快，当RBC于孔底后。

6、首先发生卷边，然后折叠，最后堆积至孔中央，形成所谓的前滞现象，但前滞现象从血清边缘不整，粗糙不规则，冇经验者较易看出，前滞现象一般2〜3孔较多4孔较少。3.5用显微镜观察HBsAg阳性血球与HBsAg阴性血球无明显差异，血球相互结合很松，一吸即散。综上所述RPHA法虽有在一些缺点和问题，但在工作中注意克服，仍受广大检验工作者欢迎。在实际检验操作过程中，要严格安标准实验操作，控制好每一步的反应吋间，操作紧凑，保证HBsAg检测结果的准确性。参考文献[1】陶义训.免疫学和免疫学检测，第2版.北京:人民出版社，1997.[2】孔德

7、立.医学新进展，北京:中国科学出版社，2000.