实验十一玫瑰花环形成试验

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1、医学免疫学实验指导实验■)■—玫瑰花环形成试验由长沙达尔镩生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。BioRike简介：BioRike（中文简称"博瑞克"）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌，甶旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一

2、家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa越型盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。【实验目的】1.掌握淋巴细胞转换试验的原理和方法。2.熟悉淋巴细胞的形态特征。【实验目的】1.掌握淋巴细胞转换试验的原理和方法。2.熟悉淋巴细胞的形态特征。【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体，在体外一定条件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合，可以形成以T细胞为中心，周围黏附着多个绵羊红细胞的花环，为E花环试验（erythrocyte

3、rosettetest应用最广的有总E花环试验（Et,t为total的缩写）和活性E花环试验（Ea,a为active的缩写XEt代表被检标本中T淋巴细胞的总数，Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数，这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究，为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。【实验材料】1.1%肝素水溶液。2.Hanks•液（无Ca2+、Mg2+）PH7.4-7.6。3.

4、淋巴细胞分离液（市售商品X4.绵羊红细胞悬液：取新鲜绵羊血以；L1的比例与爱氏血球保存液混合，置4°C备用，2周内使用。5.0.8%戊二醛、姬姆萨染液。6.离心机、水浴箱，显微镜等。【实验方法】1.无菌抽取患者静脉血1毫升，加入事先有0.05毫升肝素液的试管内，混匀抗凝。1.加Hanks*液1毫升于上述试管稀释血液，然后缓慢加入盛有1毫升淋巴细胞分离液的试管中，注意不要打乱交界液面。3.2000转/分钟水平离心20分钟。4.小心吸取血浆层和分离液层之间的白色膜状的淋巴细胞层，Hanks*液洗涤两次

5、，最后用含20%小牛血清的Hanks1液将细胞调成2x106/毫升。5.将爱氏液保存的绵羊红细胞用Hanks1液洗涤三次，弃上清，将压积红细胞用Hanks'液配成1%细胞悬液（8x107/毫升X6.Et试验：将淋巴细胞悬液0.1毫升和绵羊红细胞0.1毫升混匀（细胞数合适比例为1:100）,37°C水浴10分钟，低速离心500转/分钟，5分钟，再置4°C2小时或过夜。取出后弃去大部分上清，轻轻摇匀，加0.8%戊二醛2滴固定数分钟后涂片，自然干燥后力卩1滴姬姆萨染液，覆以盖玻片，高倍镜观察。凡淋巴细胞

6、周围吸附3个或以上绵羊红细胞者为阳性花结细胞。7.Ea试验:将淋巴细胞悬液0.1毫升和绵羊红细胞0.02毫升混匀（两者比例为1:20），低速离心500转/分钟，5分钟，弃去大部分上清，轻轻摇匀，加0.8%戊二醛2滴固定数分钟后涂片，其余程序同Et试验。【实验结果】随机计数200个淋巴细胞，记录其中形成花结的和未形成花结的淋巴细胞数，然后根据下列公式计算E花结形成百分率：E花结形成百分率=形成花结细胞数/（花结细胞数+未形成花结细胞数）x100%#—般正常值Et为50-70%,Ea正常值为25—35

7、%。【注意事项】1.一定要用新鲜血，否则会影响细胞活性，且绵羊红细胞受体会从T细胞表面脱落2.计数前，重悬和混匀细胞要轻柔，否则花结会散开消失。思考题：3.E花环形成的原理是什么？为什么测Ea比Et更有意义？