实验设计作业骆德强

《实验设计作业骆德强》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、2015研3班406521815156骆德强实验设计作业题□预设：(1)A药物具有在心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用(2)心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变研究目的：(3)B基因的表达产物与心肌细胞缺血问的关系(4)在A药物保护心肌细胞免受缺血再灌注损伤的过程屮，B基因的表达产物是否参与.其中背景资料1、心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心脏的供血不是一成不变的,而是始终存在着波动，但这种波动经过机体自身调节，促使血液供需相对恒定，

2、保证心脏正常工作。如果任何一种原因引起心肌缺血，经机体调节不能满足心脏工作需耍，这就构成了真正意义上的心肌缺血。心肌缺血对心脏和全身都可能带来许多不利影响。氧是心肌细胞活动必不可少的物质，而氧是通过血液输送给细胞的。心脏没有“氧仓库”，完全依赖心肌血供，所以一旦缺血，立刻会引起缺氣。缺氧的直接后果是心肌细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动吋必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律火常、心功能卜*降。同时，代谢的废物也不能被宥效及时地清除，易产生不利影响。缺氧会导致炎症、凋亡、氧化，最终会影响心脏的收缩功能。若有20%〜25%的心

3、肌停止收缩，通常会出现左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收缩，就会有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突然发生，就会出现非常危险的心源性休克。急性心肌梗死就常与这种情况相关心肌缺血还会损害舒张功能。收缩不&和舒张不&结合起来，易导致心室充盈压升高，引起肺充血，还可引起复杂的物质代谢紊乱和心肌电活动失常。总结：心肌缺血导致的主要后果是心肌缺氧。背景资料2:异丙肾上腺素(TS0)诱导的心肌缺血动物模型广泛用于心肌缺血研究和药效评价。具体建模方法见实验设计。题目分析：(1)B基因的表达产物与心肌细胞缺血问的关系：B基因表达产物为B蛋

4、白，因此可以使用免疫细胞化学法来显示B蛋白。具体细节详见免疫组化操作方法。心肌细胞缺血模型与正常模型的差别町能有两种情况，一种是B蛋白增多，另一种是B蛋白减少。(2)A药物发挥作用时候B基因是否参与其中：参与其屮冇两种含义，第一种是A药物导致B基因表达发生改变，第二种是A药物和B基因共同作用，但是二者没有因果关系。区别二者仅需通过对照实验即可证实。结果猜想：1.心肌&血导致B基因活化，B蛋白增多：(1)B蛋白会降低心肌细胞对氧气依赖，使心肌细胞对能量的需求得到一定程度的补偿，比如B蛋0是促进心肌无氧呼吸的蛋0。(2)B蛋白是心

5、肌正常工作需要的蛋白，与心肌功能密切相关。由于缺氧使得B蛋白功能下降，为了维持心肌的功能，发生代偿反应，使得B蛋白增多，来弥补b蛋a的功能降低。1.心肌缺血导致B基因活性降低，B蛋白减少：B蛋白是心肌正常工作需要的蛋白，与心肌功能密切相关。由于缺氧使得B蛋白功能下降，而B蛋闩功能下降直接导致心肌功能下降。2.A药物的作用：(1)为心肌提供一定的氧气。(2)为心肌直接提供能量。(3)与B基因有关。实验设计：一、动物疾病建模(1)试剂：盐酸异丙肾上腺素注射液(2)实验动物：雄性大鼠(3)步骤：大鼠预先适应2周后开始实验，大鼠随机平

6、均分成2组：(a)正常对照组。12只大鼠每天皮下注射生理盐水，连续10天；(b)模型组。24只大鼠每天皮卜*注射ISO(2mg•kg-1),连续10天。分别于注射ISO5天后、10天后，即实验幵始第6天(采样点1，造模5天)、第11天(采样点2,造模10天)，以及第16天(采样点3,模型恢复5天)、20天(采样点4,模型恢复9天)早晨采样。(c)药物组。在模型组中从第六天注射TSO开始取小鼠注射药物。其他采样同模型组。时间/天(a)正常对照组(b)模型组(c)药物组1生理盐水共12只ISO共12只ISO共9只•••生理盐水IS

7、OISO6生理盐水ISO取出3只实验ISO取3只加药物••e生理盐水1S0ISO10生理盐水ISOISO11取出3只实验取3只加药物•••16取出3只实验取3只加药物••e20取出最后3只实验(每次加药后当天取岀小鼠做实验)采样：将心脏整个取出，剪碎获得心肌细胞。多次取样目的是为了获得不同程度的心肌缺血细胞。如粜不同程度的细胞经比较结果相同则更有说服力。以下所说的各组小鼠都指代每次取样的小鼠心肌细胞。由于取样多次，则比较时也同样比较多次。二、B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系如采前两次采样中，对照组的B蛋白表达产物都少于实

8、验组，则心肌缺血导致B基因活化,B蛋白増多：仍需进一步实验来验证为猜想1(1)或者1(2)。取正常对照组和模型组小鼠进行尤氧呼吸产物检测(乳酸)，若检测到含量相差不大，则否定该猜想。若含量相差大，则可以进一步证明1(1):将B基因剪切并整合到细菌屮，若该细菌无氧呼吸强度与正常