组织培养技术在葡萄无菌苗生产的应用

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1、组织培养技术在葡萄无毒苗生产的应用谢文华21516063摘要：在葡萄种苗选育中，传统方法时间长，效率低，难以满足大规模的农业生产要求，组织培养作为一种新兴的技术与研究方法，利用包括茎尖、胚轴、叶柄、叶片、胚珠等多种外植体、多水平的再生途径，广泛应用于葡萄脱毒、快繁。现对目前生产上主要发生的葡萄病毒病、脱毒培养技术进行简要综述，并对当前的研究进展做以展望。关键词：葡萄种苗、病毒病、脱毒葡郜(ViniferaL.)隶属葡细科葡钧属的藤木梢物，在世界上分布范围广，栽培Ifii积大，其产暈仅次于柑橘位佔果树屮第2位。当前，葡萄与葡萄酒己成为国际重要商品，每年葡萄生产童的

2、80%均用于制洒，酿洒葡萄品种的培育与种植前景十分广阔。。似葡萄病靑病迅速蔓延，严甫威胁葡萄产业的健康发展。对葡萄病毒病的防治除拔除病株、严禁采川带毒接穗和砧木外，敁根木的措施就是大S培育无病毒苗木。利川组织培养进行脱毒不但突出了生产的实用性，而且可以节省人力物力，使脱毒工作更加简便有效。1.葡萄主要病毒病1.1葡萄扇叶病葡萄扇叶病乂名葡萄退化，世界葡萄产区均有分布，在我国普遍发牛.，是影响我国葡萄生产的主耍病害之一。病毒的不同株系引起寄主产生不同的反应，冇3种症候群：传染性变形、黄化、镶脉或称脉带。葡领扇叶病毒属线虫传多角体病毒组，机械传染，病毒颗粒同轴,直径

3、30纳米，具角状外貌。扇叶痫毒极易进行汁液接种，病毒可佼染胚乳，但不能佼染胚，故葡细种了不能传播，但试验草木寄主吋由种了传播。病毒的自然寄主只限于葡钧属。1.2葡萄卷叶病葡萄卷叶病具半潜隐特性，在人部分牛长季节不表现疬状，多数欧亚种病株在果实成熟阶段冰出现症状。在采收后到落什前叶片症状最明叶缘反卷，脉间变黄或变红，仅主脉保持绿色；有的品种则叶片逐渐T枯变褐。卷叶病发屮于葡萄的所有品种。症状随品种、环境和季节而异。春季的症状较不明显，病株比健株矮小，萌发迟。葡细卷叶病可能是由兌杂的病毒群侵染引起，其成员大多属黄化病毒组。1.3葡萄茎痘病葡萄茎痘病的主要特征足砧木和

4、接穗愈合处茎膨人，接穗常比砧木飢，皮飢糙或增厚，剥丌皮，可见皮反Iftf冇纵向的钉状物或突起纹，在对应的木质部表Iftf现凹陷的孔或槽。葡镏染茎痘病r;长势差，病株矮，春季萌动推迟月余，表现严重哀退，产餅锐减，不能结实成死亡。是病毒，科关毒源种类尚在研究屮。2葡萄苗脱毒培养技术2.1培养基的选择葡萄苗的培养棊一般分为两炎，一类是分化培养基，在生产上常用的是1/2MS+6-BA+1BA+GA,不M品种的6-BA和GA的浓度不M。另一类为生根培养棊在生产上常用的是1/2MS+尔K素。培养基琼脂浓度0.75%。培养基中蔗糖浓度和各种生L＜素的浓度需要根据不同品种进行调

5、配，选定最适浓度。迕中根培养基中中长素的选用上，有研究发现IBA效果要比NAA的好m2.2采取材料对消毒效果的影晌不同吋间取材，消毒效果不同，随着取材吋间的推迟，葡萄病害越南來越重，消毒效果越來越差，而且消毒成功的茎段成苗也越來越少.采集外椬体吋，应采集正在十长的葡萄树的上部嫩枝，停止生长的植株不宜采取［2］同时，外植体的采集不宜在雨天或者雨P立即进行。雨水会携带人景病苘，从而加人消毒的难度。另外，在郎风红的试验屮她发现在消毐效果和成泔率上，赤霞珠耍优于蛇龙珠、梅鹿特及霞多丽。因此4:选择组培品种时候应该优先考虑消毐效果和成率高的品种。2.3不同激素在诱导葡萄愈

6、伤组织的影响植物激素足影响椬物纟II织培养屮愈伤饥织、茎尖分化和卞根关键因索之一，具奋刺激形成层细胞分裂、诱导愈伤组织和不定芽的形成等生理作川［3-4］n前，2,4-D在葡萄愈伤飢织的诱导屮使用较为广泛，鲍雪珍、卢炳芝等通过使用一定浓度的2,4-1）诱导胚性愈伤组织发生157］。而在张丽关于5个酿酒葡萄纟II织培养的实验屮却发现2,4-D卯不能很好的诱导出酿酒葡萄的愈伤组织，伹足利川NAAO.5mg/L与6-BA.2.Omg/L组合对愈伤纟II织诱导效果明显，另外在她的实验屮，添加GA.A2mg/L到培养基中，对五个品种的茎尖愈伤组织的分化效果有明显的提尚，从这

7、些结果來肴，激素的水平和种类不同品种间作川效果差别较人，每个品种的虮织培养及再生体系建立吋，耑要对激素浓度进行较多的调整才能找到最适浓度，这也足飢织培养技术的关键之一。2.4葡萄苗脱毒技术目前使用的脱毐技术主要分四种：热处理脱再、茎间培养脱毐、花药培养脱扉和低温脱毐。热处理脱毐法足利用a温下植物组织中的病毒部分或者全部失活的方法。利用某些病扉受热r;不稳定的特点，将葡萄完整植株或组织器官进行热处理，使病毒失去活性。但这种方法局限太大，缺点很明显，对一些耐热病毐不起作用，从外椬体本身来讲，也只适合一些耐热性好的品种，因此作为单一的脱毒技术在生产上使用效果不佳。茎间

8、培养脱寿是目前应用最广的