小鼠骨髓基质干细胞定向诱导为前体心肌细胞

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1、小鼠骨髓基质干细胞定向诱导为前体心肌细胞【关键词】骨髓基质干细胞　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethedifferentiationfrommousemesenchymalstemcell(MSCs)intocardiomyocyteprogenitor.METHODS:MSCsmousemarroeter.MSCsyoblastinducer.TheinducedMSCsicroscopeandimmunofluorescencetechnique.RESULTS:Theisolatedsubcul

2、turingMSCsdisplayedafusiformcelllikemorphology.MSCslypositiveforCD29andCD44,butdidn’texpressCD34andCD45.ThroughRTPCRanalysis,inducedMSCsexpressedcardiomyocytespecifictranscriptionfactors(NKx25/CsxandGATA4)andfetalventricularcardiomyocytespecificgeneβmyosinheavychain

3、(βMHC),butdidnotexpressadultventricularcardiomyocytespecificgenemyosinheavychain(αMHC).InducedMSCsexpressedαsarericactinanddesminbyimmunofluorescencetechniqueandmyofilamentformationicroscope.CONCLUSION:MSCscanbeinducedtodifferentiateintocardiomyocyteprogenitor.　　【Ke

4、yarroesenchymalstemcell;differentiation　　【摘要】目的：体外诱导小鼠骨髓基质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化.方法：MSCs通过细胞传代培养，并通过流式细胞仪进行鉴定.MSCs经过5杂氮胞苷诱导后，通过RTPCR,透射电镜和免疫荧光技术检测诱导后的MSCs.结果：培养的MSCs为形态学均一的梭形细胞，有时可见细胞融合.流式细胞仪显示MSCsCD29，CD44表达阳性，CD34，CD45表达阴性.经过5杂氮胞苷诱导后的MSCs表达Nkx25/Csx，GATA4，βMHC基因和αsareri

5、cactin和desmin蛋白，透射电镜显示诱导后的MSCs有肌丝形成.结论：经过5杂氮胞苷诱导后的MSCs可以向前体心肌细胞分化.　　【关键词】骨髓基质干细胞；分化　　0引言　　成年哺乳动物心肌细胞本身缺乏增殖分化能力，心肌细胞损伤坏死后必然由纤维组织替代，导致心脏的收缩舒张功能障碍.细胞移植治疗缺血性心脏病是通过移植具有成肌潜能的各种干细胞至心梗区，使其在心肌梗死区增殖分化为肌组织，增加有功能的肌细胞数量，改善心功能.骨髓基质干细胞(MSCs)是具有多种分化潜能的干细胞，具有巨大的功能可塑性，可以在新的微环境中生成新的组织

6、所必需的细胞株，研究表明，MSCs可以在缺血心肌中分化为心肌细胞［1］.MSCs易于体外分离和体外培养，易于外源基因的导入和表达，另外骨髓再生能力强，易于反复获取，这使得MSCs成为细胞替代治疗心肌梗死的理想选择，具有重要的应用前景［2］.我们通过体外培养、诱导MSCs，进一步验证了MSCs是具有向心肌细胞前体分化潜能的干细胞，并分析了MSCs诱导分化的机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　3~4a公司），Trizol试剂、一步法RTPCR试剂盒（SuperscriptTMOneStepRTPCRTaq）（Invitroge

7、n公司），引物Nkx25/Csx（同源异型盒基因216bp），GATA4（锌指转录因子275bp），βMHC（β肌球蛋白重链205bp），αMHC（α肌球蛋白重链302bp），DNA甲基转移酶（MTase610bp）由上海生工合成.FITC标记的羊抗大鼠IgG多克隆体（BDBiosciences公司），大鼠抗小鼠CD34mAb（Hybiotechnology公司），大鼠抗小鼠CD29mAb（BDBiosciences公司），大鼠抗小鼠CD45mAb（Ebiosciences公司），大鼠抗小鼠CD44多克隆抗体（Ebioscie

8、nces公司）.ECL试剂盒(Amersham公司).小鼠抗Desmin抗体、小鼠抗αsarericactin抗体、FITC标记的二抗(羊抗小鼠IgG)、Cy3标记的二抗(羊抗小鼠IgG)购自武汉博士德公司.　　1.2方法　　1.2.1MSCs的分离、培养和诱导用21号针头注