头孢吡肟对医院分离的革兰阴性杆菌的体外抗菌活性的四种方法学评价

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1、头孢吡肟对医院分离的革兰阴性杆菌的体外抗菌活性的四种方法学评价目前测定头孢吡肟体外抗菌活性常用的有几种方法:用作定性的纸片扩散法和定量的稀释法（包括琼脂稀释法和肉汤稀释法），其中琼脂稀释法被作为标准参考方法，但因操作复杂费时主要用于新药体外药效学研究;商品化的自动化细菌鉴定药敏系统可进行体外抗菌活性测定，我院MICROSCAN细菌鉴定药敏系统就是采用半定量肉汤稀释法。该系统同时提供快速接种法和标准浊度法，因快速接种法操作简便、快速，应用更广。通过参加全国细菌耐药监测网，发现我院与其它医院比较，革兰阴性杆菌对头孢吡肟的体外敏感性有明显差异。此种差异可能于本地

2、区细菌的特异性或我院采用MICROSCAN快速接种法的方法学差异。为分析这种差异，对我院MICROSCAN快速接种法结果准确性进行评价。本实验设计以琼脂稀释法为参考标准，观察纸片扩散法、标准浊度法及MICROSCAN快速接种法与参考方法的一致率，进行方法学的比较。　　1材料与方法　　1.1菌种四川大学华西医院临床微生物实验室2004年9月～11月送检的住院患者标本中分离得到的于痰、尿、血、脓液、胆汁和其它分泌物的各种革兰阴性杆菌301株，主要有ESBL阴性大肠埃希菌和克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属和嗜麦芽寡养单胞菌等。1.2菌种鉴定和细菌体

3、外药物敏感性实验细菌鉴定按全国临床检验操作规程［4］常规操作，全部使用自动化MICROSCANICROSCAN快速接种法对301株革兰阴性杆菌进行同期体外药敏测定。琼脂稀释法使用Bristol-MyersSquibb公司生产的头孢吡肟（批号3E77405）。纸片扩散法的药敏纸片为英国Oxoid公司的头孢吡肟（每片30μg）。标准浊度法用浊度仪调制1×108CFU/ml的菌液，使用和仪器快速接种法相同批次的鉴定药敏板。以上几种方法均按照美国临床实验室标准化研究所（CLSI/NCCLS）2004年版的规定操作［5］。头孢吡肟快速接种法接种后，用MICROSCA

4、NICROSCAN快速接种法使用质量合格的鉴定药敏板，出厂前均经过校定，在本实验室每批次的鉴定药敏板均用标准菌株（大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853）进行质控，仪器的使用严格按照生产厂家的说明书操作。标准浊度法每次使用浊度仪经空白和4×108CFU/ml菌液校正。1.4结果判读标准按照CLSI/NCCLS（2004年）判读结果。　2结果2.1琼脂稀释法301株临床常见革兰阴性杆菌对头孢吡肟的总敏感率为78.1%，大肠埃希菌的敏感率为93.8%，肺炎克雷伯菌为96.8%，铜绿假单胞菌为82.4%，不动杆菌为70.1%，阴沟肠杆菌为8

5、2.7%，嗜麦芽寡养单胞菌为41.2%（表1）。2.2琼脂稀释法与其它三种方法比较分别用琼脂稀释法、纸片扩散法、标准浊度法和MICROSCAN快速接种法测定头孢吡肟对301株革兰阴性杆菌体外敏感性。以琼脂稀释法为标准方法，其它三种方法与其结果不一致的菌株数分别为:纸片扩表1株革兰阴性杆菌对头孢吡肟的敏感率　2.3琼脂稀释法与其它三种方法的统计学比较计算三种方法与琼脂稀释法的结果符合率分别为:纸片扩散法99.0%，标准浊度法98.3%，MICROSCAN快速接种法95.3%。建立χ检验，计算三种方法与标准参考方法结果有无统计学差别（表3）。纸片扩散法和标准浊

6、度法与参考方法结果无统计学差异，MICROSCAN快速接种法与参考方法结果有统计学差异。将三种方法与标准参考方法的符合率两两比较，结果显示，纸片扩散法和标准浊度法两者与参考方法的符合率均高于MICROSCAN快速接种法，但它们两者间无统计学差异。表2琼脂稀释法与三种方法的结果比较3讨论头孢吡肟是在我国第一个上市的第四代头孢菌素类药物，对临床常见的革兰阴性杆菌有较好的抗菌活性，它与青霉素结合蛋白亲和力强，具有抗菌谱广、杀菌活性强等特点，是目前除碳青霉烯类抗生素外临床控制革兰阴性杆菌感染的有效抗生素之一。本实验选择301株临床常见革兰阴性杆菌，包括大肠埃希菌、

7、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌等。采用琼脂稀释法获得的301株革兰阴性杆菌药敏结果显示，菌株对头孢吡肟的总敏感率为78.1%，其中对肺炎克雷伯菌、弗氏柠檬酸杆菌和荧光恶臭假单胞菌几乎100%敏感，对铜绿假单胞菌的敏感性也较高，与文献报道一致。头孢吡肟对铜绿假单胞菌的抗菌活性明显优于第三代头孢菌素，与妥布霉素联合治疗可提高对铜绿假单胞菌分离株的杀灭能力［6，7］。实验显示，在我院头孢吡肟对肠杆菌科细菌和非发酵菌具有较好的体外抗菌活性。我院采用的MICROSCAN快速接种法操作简单快速，直接挑取菌落充分混匀于生理盐水后倒于鉴

8、定药敏板，其中挑取菌落这一环节易出现人为偏差，菌落的大、小将直接影