肾阳虚与血管升压素

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1、肾阳虚与血管升压素【摘要】目的研究肾阳虚状态下血管升压素-环磷酸腺苷-水通道蛋白2(AVP-cAMP-AQP2)信号途径的功能变化，探讨肾主水的现代医学机制。方法20只成年雄性SD大鼠分为对照组和模型组。主要采用放免法测定血AVP和肾髓质cAMP水平、免疫组化技术检测集合管AQP2表达。结果与对照组相比，模型组大鼠的尿量明显增加，血AVP和肾髓质cAMP水平下降，集合管上皮细胞AQP2表达减少。结论肾阳虚时AVP-cAMP-AQP2信号途径功能下降。【关键词】肾阳虚;血管升压素;水通道蛋白2　　Abstract：ObjectiveTode

2、tectthemodernmedicalmechanismofKidney-yangdeficiencybyresearchingthefunctionofAVP-cAMP-AQP2inKidney-"yang"Deficiency.Methods20maleadultSDratslydividedintocontrolandmodelgroups.RadioimmunoassayployedtodetecttheAVPandcAMPlevels,andimmunohistochemistryeasureAQP2expressioninc

3、ollectingducts.Resultsparedearkedly,plasmaAVPandcAMPlevelsinrenalmedullartissueodelgroup.ConclusionThefunctionofAVP-cAMP-AQP2pathg·kg-1·d-1腺嘌呤(北京思语伟业生物技术有限公司)灌服，对照组只给予灌胃刺激，共21d。　　1.3尿量及尿渗透压检测造模结束后，将大鼠置于代谢笼中，收集24h尿液，再利用冰点渗透压计(广州巿中璐仪器有限公司，Osmo16S)检测渗透压。　　1.4血浆AVP和肾髓质cAMP检测大

4、鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4ml/100g)麻醉后，按试剂盒说明书经腹主动脉取血和肾髓质组织匀浆，采用放免法检测。AVP试剂盒(批号：20071005)和cAMP放免试剂盒(批号：20071027)均购于中国人民解放军解放军总医院放免研究所。此项工作由沈阳202医院内分泌室完成。　　1.5大鼠肾髓质AQP2表达SABC法。从麻醉大鼠的升主动脉快速注入150ml生理盐水，冲去血液，取双侧肾脏髓质，4%多聚甲醛固定4h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片，厚度4μm。取切片常规脱蜡至水，置于3%H2O2(室温10min)，蒸馏水洗

5、3次;切片浸入0.01mol/L枸椽酸盐缓冲液(pH6.0)，加热至沸腾，间隔5min后再加热至沸腾，室温冷却后用0.1mol/LPBS(pH7.3)洗涤2次;滴加抗原修复液I(室温20min)，0.1mol/LPBS(pH7.3)洗涤2次;滴加正常山羊血清封闭液(室温20min)，甩去多余液体，不洗;滴加羊抗兔AQP2一抗(1∶400稀释)，4℃过夜，0.1mol/LPBS(pH7.3)洗涤2次，每次5min;滴加生物素化羊抗兔IgG(室温25min)，0.1mol/LPBS(pH7.3)洗涤2次，每次5min;滴加试剂SABC(室温2

6、5min)，0.1mol/LPBS(pH7.3)洗涤2次，每次5min;DAB显色，苏木素轻度复染，约30s，自来水水洗，1%盐酸酒精稍分色后兰化片刻;常规脱水、透明、中性树胶封片。阴性对照用PBS缓冲液替代一抗。利用BI-2000医学图像分析系统检测AQP2的光密度值。　　1.6统计学方法数据以±s表示，应用SPSS13.0进行统计处理，采用ANOVA检验，P<0.05为有显著性差异。　　2结果　　实验过程中没有大鼠死亡和脱失。模型组大鼠出现畏寒肢冷、蜷缩拱背、多尿、活动减少、体毛枯疏、无光泽等表现。AQP2表达为棕黄色颗粒，位于

7、集合管上皮细胞胞膜和胞浆处。相关检测数据见表1。　　3讨论　　中医理论认为肾主水，主宰机体的津液代谢，特别对于尿的生成和排出有直接作用。肾阳虚常伴有阳虚水泛的表现，如形寒肢冷、水肿、小便清长、尿量增加等表现。本实验观察到模型组大鼠出现畏寒肢冷、蜷缩拱背、多尿等现象，表明肾阳虚模型大鼠出现了阳虚水泛的症状。中医所说的阳虚水泛与现代医学中的体液增多较为相似。现代医学认为体液过多时，机体会启动尿液稀释机制进行代偿，即下丘脑的视上核和室旁核合成和分泌AVP减少，降低肾脏集合管对水的通透性，从而减少水的重吸收，使尿液稀释，尿量增加。上述过程是否也发

8、生于肾阳虚状态下，目前还未报道。本研究对此进行了初步探讨。表1各组大鼠尿量、尿渗透压、血浆AVP、肾髓质cAMP和AQP2表达情况(±s)与对照组比较，*P<0.05,**P<0.