适度铜缺乏对大鼠颈动脉内皮剥脱术后mmp

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1、适度铜缺乏对大鼠颈动脉内皮剥脱术后MMP周景昱，郭文怡，周宏志，贾国良，张荣庆【关键词】基质金属蛋白酶　　InfluenceofmoderatecopperdeficiencyonexpressionandactivityofMMP9andrestenosisinballooninjuredratcarotidarteries　　【Abstract】AIM:Tostudytheinfluenceofmoderatecopperdeficiencyinducedbytetrathiomolybdate(TM)o

2、nexpressionandactivityofmatrixmetalloproteinases9(MMP9)andrestenosisinballooninjuredratcarotidarteries.METHODS:MaleSpragueDag/kg2aceruloplasminlevelsonitored,andtheoraladministrationofTMcouldrapidlyreduceandsustaintheplasmalevelofceruloplasmininallTMtreated

3、animalsata70%-80%levelofreductionafter2inistratedTMdailyafterinjury.TheextentofneointimalthickeningographyalhyperplasiainTMtreatedrats1to7d（P＜0.01）.CONCLUSION:TheoraladministrationoftheCu2+chelatorTMcouldreduceneointimalthickeningafterballooninjuryintherat.

4、AndtheexpressionandactivityofMMP9oderatecopperdeficiencyinducedbyTM.　　【Keyatrixmetalloproteinases9;copper;tetrathiomolybdate;restenosis　　【摘要】目的：探讨四硫钼酸盐（TM）引起的适度铜缺乏对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生和基质金属蛋白酶9（MMP9）活性和表达的影响.方法：SD雄性大鼠随机分为铜缺乏组（TM组）和对照组，TM组术前2olybdate，MoS42-，TM）是一种

5、快速、有效的铜鳌合剂，能够与食物中和血浆中的铜及蛋白质形成复合物，使之清除，从而降低体内可利用的铜离子.研究表明铜具有显著的诱导血管生成作用〔1〕，并且是动脉损伤后再狭窄的促进因子〔2〕.有研究表明，适当降低血铜可抑制球囊成形术后的血管损伤反应〔3〕，但其相关的机制还待进一步探讨.血管球囊损伤后，血管平滑肌（VSMC）增殖、迁移和细胞外基质（ECM）重塑等一系列反应是导致内膜过度增殖、血管腔狭窄主要原因.MMPs的表达受核转录因子κB（NFκB）的调节〔4〕，后者是一种铜依赖蛋白.本实验试图探讨体内适度铜缺乏

6、对MMP9表达和血管再狭窄的影响.　　1材料和方法　　1.1材料选用SD雄性大鼠50只（由第四军医大学实验动物中心提供），质量350~450g，随机分为TM组和对照组，均给予普通混合饲料喂养.TM组术前2g/kg，测定血浆铜蓝蛋白作为铜水平的代表〔5〕.在服用TM前、手术当日和服用TM最后一天测定血浆铜蓝蛋白水平，使之在手术前降低到基础水平的（20±2）％，并维持到取材当天.对照组给予蒸馏水强饲.　　1.2方法　　1.2.1大鼠颈总动脉内膜剥脱模型的建立用浓度为0.3g/L戊巴比妥腹腔内注射麻醉SD大鼠，颈正

7、中切口，经左颈外动脉插入Fogarty2F球囊导管至左颈总动脉根处，注入适量生理盐水充盈球囊，回拉导管至颈总动脉分支处，重复3次，移出球囊导管，结扎左颈外动脉.大鼠分别在术后1，3，7和14d处死，取左侧颈总动脉液氮冻存或用40g/L甲醛固定，取右侧颈总动脉为正常组织对照.　　1.2.2形态学观察40g/L甲醛固定的颈总动脉常规脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察、照相.　　1.2.3蛋白提取液制备液氮冻存的大鼠颈总动脉用剪刀剪碎，加入裂解液（50mmol/LTrisHCl缓冲液pH7.6，10g/LS

8、DS，1mmol/LPMSF，10mg/L亮肽素），玻璃匀浆器匀浆，冰孵15min，收集于1.5mL离心管中，以13500g于4℃离心10min.收集上清液，分装，储存于-70℃冰箱.蛋白浓度用BCA法（PIERCE公司）测定.　　1.2.4MP9的I抗（SantaClaus），4℃孵育过夜，TBST洗涤后加II抗，DAB法显色.　　1.2.5MMP9活性明胶酶谱分析各组取等量蛋白（20μg）提取液