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《真菌感染东亚飞蝗脂肪体、血细胞均一化文库构建和部分序列分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、ConstructionandanalysisofanormalizedcDNAlibraryfromFatbodyandHemocyteofLocustmigratoryInfectedbyMetarhiziumanisoplieAThesisSubmittedtoChongqingUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofSciencebyYangXiaofengSupervisor:Prof.XiaYuxianMajo
2、r:MicrobiologyCollegeofBioengineeringofChongingUniversity,Chonging,ChinaMay,2008重庆大学硕士论文中文摘要摘要在最近的20多年里，昆虫免疫在基础研究和应用研究上都得到极大的关注，成为目前研究的热点之一。然而，大部分的研究主要是对由细菌诱导的昆虫免疫，从分子水平研究有真菌诱导的昆虫免疫的报道还不多，因此引起越来越多的兴趣。绿僵菌是一类应用广泛的昆虫病原真菌，在生物防治中起着重要的作用，东亚飞蝗属直翅目昆虫，是不完全变态昆虫的代表和世界性的农业
3、害虫，在长期进化过程中，形成了自身的免疫体系，在生物学研究方面有重大的现实意义。研究真菌感染后东亚飞蝗的基因转录信息能获取分子昆虫学方面无价的信息，并能为医学，农业学，生态学相关昆虫的比较研究开辟新的道路。同时更好地理解昆虫的防卫机制应对真菌感染，将为识别昆虫防卫基因，进而为生产高效的真菌杀虫剂加快对有害昆虫的生物防治提高新的策略成为可能。本文以东亚飞蝗为研究材料，通过注射绿僵菌分生孢子，诱导其产生免疫反应，提取脂肪体和血细胞的mRNA,并通过RT-PCR和PCR验证无真菌DNA和mRNA污染，借助SMART技术和D
4、SN均一化技术,成功构建了均一化cDNA文库。随机挑取200阳性克隆测序，得到190条ESTs序列(165个unigenes)，其中未发现真菌基因的存在，同时也识别了重要的代谢、免疫相关、受体、转录控制因子、肽酶、细胞骨架、线粒体等基因,结果表明该方法在构建真菌感染昆虫的cDNA文库是可靠、有效的。主要研究结果如下：1.根据绿僵菌Tubulin基因和蝗虫的Histone基因分别设计了绿僵菌特异性引物Tu1、Tu2和蝗虫特异引物H1、H2,并对其进行了特异性和灵敏度分析。结果为：两对引物经交叉检测，均为阴性。蝗虫特异引
5、物H1、H2能检测出1pg的蝗虫DNA,绿僵菌特异性引物Tu1、Tu2能检测出10pg绿僵菌DNA.2.将感染真菌的蝗虫的脂肪体和血细胞为材料提取mRNA,通过RT-PCR,以绿僵菌特异引物H1、H2和蝗虫特异引物Tu1、Tu2进行验证。结果表明，从绿僵菌侵染后的蝗虫中分离到的脂肪体和血细胞mRNA中无真菌DNA和RNA的污染。3.随机挑选了190个cDNA克隆进行测序和分析。通过Blast-X,Blast-N与GenBank数据库的比对中发现，没有发现任何序列与真菌基因有着明显的相似性。-5其中有57%的cDNA序
6、列却没有明显的相似性(Evalue>10),43%的cDNA序列与-5真菌的基因有明显的相似性(Evalue<10).I关键词:东亚飞蝗;绿僵菌;脂肪体和血细胞；均一化cDNA文库;EST分析重庆大学硕士论文英文摘要ABSTRACTInsectimmunityhasreceivedagreatdealofattentioninthepast20yearsbothfromabasicresearchaswellasappliedperspective.However,Themostofstudieshadbeenfac
7、usedontheimmuneresponsetobacteriaandtheantibacterialdefencereactionshavebeeninvestigatedininsects.theimmuneresponsetofungusispoorlyunderstoodandthestudiesisfewatmolecularlevel.Soinfectioncausedbyfungibecometheobjectofrecentinterest.Metarhiziumanisopliae,akindof
8、entomopathogenicfunguswidelyappliedindomesticandabroad,hasanimportantroleinbiologicalcontrolofinsect,Themigrat-orylocust(Locustamigratoria)isanorthopteranpestandareprensenta
