重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与hsp70, bax的表达

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1、重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与HSP70,bax的表达：王林，辛晓燕，王哲，谢学军【关键词】妊娠并发症　　【Abstract】AIM:Tostudytherelationshipbetples25unplicatedthirdtrimesterpregnanciesandfrom25casesofSPIH.Lightmicroscopyandelectronmicroscopymunohistochemicalstaining.TheexpressionofHSP70proteinonstratedanthirdtrimesterplacentaltissues.Mediansand

2、interquartilerangesofSPIHgroupalcontrolalcontrol,theexpressionofHSP70increasedinplacentasofSPIHgroup.Thepositiveratesofbaxultaneous.TheexpressionofHSP70doesnotincreaseresistancetoplacentalapoptosisinSPIHanditmayplayaroleinthepathophysiologicmechanismofPIH.　　【Key×2cm×1cm的组织（避开钙化灶）.生理盐水冲洗后，每块标本切

3、取约1cm×1cm×1cm的组织，40g・L1PBS甲醛溶液固定.用于电镜检查的组织放入25g・L1的戊二醛液中固定.其余部分立即置入-70℃冻存.前者常规石蜡包埋，4μm连续切片备染.　　1.2.2光镜、电镜检查所有的标本均行光镜检查.切片用苏木精伊红染色，分别由两人观察，双盲操作.每张切片观察10个高倍视野，蜕膜组织细胞不计数在内.使用透射电镜各检查4例SPIH及正常胎盘组织.所检标本与相对应的光镜检查切片取自同一胎盘组织块.　　1.2.3免疫组化切片脱蜡后行抗原修复，分别滴加HSP70及bax抗体4℃过夜；DAKOEnVision加入后温育1h，D

4、AB显色.苏木精复染，脱水封片.光镜观察.阳性结果为细胞内有棕黄色颗粒出现，依显色程度分3级：阴性无显色，浅棕黄色为阳性，棕褐色为强阳性.　　1.2.4gCl21mmol・L1,EGTA1mmol・L1,PMSF0.1mmol・L1,βmercaptoethanol5mmol・L1,CHAPS5g・L1,Glycerol100mL・L1），置入匀浆器中捣碎，冰浴30min后，低温高速离心12000g，30min，取上清液.紫外线分光光度计测样品浓度，等量蛋白上样进行SDSPAGE电泳.100V恒压电

5、泳约3h后，转印于硝酸纤维素膜.用小牛血清白蛋白封闭，加入1100稀释的HSP70抗体，4℃过夜后，37℃复温1h.110稀释的鼠抗DAKOEnVision放大信号，DAB显色后照相.图像分析，测表达蛋白的灰度值.　　统计学处理：应用SPLM统计学软件包.两组细胞凋亡的显著性检验用MannicroscopyofplacentaltissueofSPIH,Apoptoticnucleiesterplacenta,transmissionelectronmicrographshomunohistochemicalstainingofHSP70inplacentaltissueofnor

6、malcontrol×400（略）　　1:Ｎormalcontrol;2:SPIH;3:Marker.　　图4munohistochemicalstainingofbaxinplacentaltissueofSPIH×200（略）3讨论　　已往的研究表明，细胞凋亡与胎盘的发育老化的过程及病理妊娠的发生发展有关.本实验观察到：重度妊高征胎盘组织中细胞凋亡较正常晚孕胎盘组织增高.后者的细胞凋亡是一种生理现象，而SPIH胎盘组织中细胞凋亡的增多则是病理性的.妊高征的基本病变为全身小动脉痉挛，使各器官组织因缺血缺氧而造成损害.凋亡细胞增多可能是继发于局部血供不良、胎盘床缺氧等变化，是清除受

7、损组织的重要现象.Nelson等认为胎盘滋养层细胞凋亡是协助胎盘物质交换的生理过程之一［8］.妊高征胎盘凋亡细胞的增多为营养物及氧顺利地运送到胎儿，起到了一定的代偿作用.需要说明，细胞凋亡没有分子标志物，对凋亡细胞的确认依赖于形态学特征［9］.目前，在确认和计数细胞凋亡上，TUNEL技术有广泛的应用［10］.但在研究胎盘的细胞凋亡时，发现有假阳性等问题［9,11,12］.因此，在电镜的配合下使用光镜计数仍是可靠易行的研究方法.HSP70在胎盘中的表达及功能的研究不多见