增殖细胞核抗原和cd44mrna在伴有静脉侵袭的结直肠癌中的表达及其与肝转移的关系

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1、增殖细胞核抗原和CD44mRNA在伴有静脉侵袭的结直肠癌中的表达及其与肝转移的关系【关键词】,增殖细胞核抗原关键词:增殖细胞核抗原;CD44;结肠直肠肿瘤;肝肿瘤/继发性;聚合酶链反应摘要:目的研究伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中增殖细胞核抗原（PA）和CD44mRNA的表达及其与肝转移的关系.方法采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测31例伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中PA和CD44mR-NA的表达状况.结果PA和CD44mRNA在结直肠癌组织中阳性表达率分别为100%和64.5%.在有肝转移的结直肠癌组织中，PA

2、和CD44mRNA的强表达率分别为94.1%和70.6%，表达强度明显高于无肝转移者（P<0.05和P<0.01）.PA和CD44的表达存在正相关（r=0.67，P<0.05）.结论结直肠癌组织中PA和CD44的联合检测对判断癌细胞的肝转移具有一定的参考价值.　　Keys;liverneoplasms/secondary;poly-merasechainreaction　　Abstract:AIMToinvestigatetheexpressionofprolifera-tingcellnuclearan

3、tigen（PA）andCD44mRNAinvenousinvasionalcolorectalcanceranditsrelationshipetastasis.METHODSReversetranscriptase-polymerasechainreaction（RT-PCR）RNAin31casesofcolorectalcanceretastasis.TheexpressionsofPAandCD44mRNAin31casesofvenousinvasionalcolorectalcancer.RESULTSPos

4、itiveexpressionratesofPAandCD44mRNAinthecolorectalcanceretastasis（P<0.05andP<0.01）.Incasesofcol-orectalcanceretastasis，94.1%and70.6%RNA，respectively，significantlyhigherthanthoseetastasis.Thereightbeusefulforevaluatingthelivermetastasisofcancercells.　　0引言　　既往

5、研究报道，静脉的侵袭程度与肿瘤肝转移的发生率和范围呈正相关.增殖细胞核抗原（prolifer-atingcellnuclearantigen，PA）作为细胞增殖活性的主要指标，与恶性肿瘤的侵袭转移与预后密切相关［1］.而细胞粘附分子与肿瘤细胞的侵袭转移行为有关，在肿瘤的发生、发展和转移中发挥着作用［2］.本文旨在用RT-PCR方法研究PA和粘附分子CD44mRNA在伴有严重静脉侵袭的结直肠癌组织中的表达，并探讨两者与结直肠癌肝转移的关系.　　1对象和方法　　1.1对象本院收治的伴有严重静脉侵袭的结直肠癌31（男20，女11

6、）例，年龄44～82（平均66）岁.按病理学诊断标准，结直肠癌静脉侵袭程度分为v0～v3，选取严重静脉侵袭的v3期病例作为研究对象，伴有肝转移者17例.术后立即将肿瘤标本投入液氮，-80℃保存备用.RNA抽提试剂盒购自Gibco公司;Taq酶购自Takara公司;PA、CD44及β-actin的引物均由上海博亚公司合成.PA的上游引物序列:5’-GCCGAGATCTCAGCCATATT-3’，下游引物:5’-ATGTACTTAGAGGTACAAAT-3’;CD44上游引物序列:5’-CTTCATCCCAGTGACC-TCA

7、G-3’，下游引物:5’-TGCCACTGTTGATCAC-TAGC-3’;β-actin上游引物:5’-CACCATGTACC-CTGGCATTG-3’，下游引物:5’-TAACGCAAC-TAAGTCATAGT-3’.预期扩增产物的大小分别为452bp，446bp和243bp.　　1.2方法利用TRIzol试剂盒（Gibco），按操作说明提取组织总RNA.分光光度计测量RNA纯度及含量，-80℃保存备用.在50μL的反应体积中加入5μg总RNA，5×反应缓冲液10μL，10mmol・L-1dNTPs5μL

8、，RNasin20U，oligo（dT）12-180.25μg，反转录酶（M-MLV，Gibco）200U，0.1mol・L-1DTT0.5μL，置37℃孵育1h，65℃加热5min终止反应.在25μL反应体积中加入cDNA0.1μg，10×PCR缓冲液2.5μL，2mmol・