吴茱萸水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的高效液相色谱含量测定

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1、吴茱萸水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的高效液相色谱含量测定谢娟，张启云，余日跃，刘红宁，徐国良【摘要】　　目的测定吴茱萸水提物中的吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。方法采用碱性氯仿萃取处理样品，高效液相色谱（HPLC）法测定。色谱条件为AgilentZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(体积比为49∶51)，检测波长225nm，流速1.0ml/min，柱温25℃，进样量20μl。结果吴茱萸碱浓度在0.2～4.0μg/ml范围内呈良好的线性关系，r

2、=0.9997，平均回收率为101.50%，RSD=1.93%；吴茱萸次碱浓度在0.5～6.0μg/ml内呈良好的线性关系，R=0.9999，平均回收率为100.80%，RSD=0.72%。结论该方法简便、准确、分离效果好，可以用来测定吴茱萸水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。【关键词】吴茱萸碱；吴茱萸次碱；高效液相色谱　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofevodiamineandrutaecarpineintheplesinedbyHPLC.Th

3、eextratedfluidedonAgilentZorbaxEclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)columnobilephaseofl/min.Thedetection.Thecolumntemperatureninehadalinearrangeinthecontentsof0.2～4.0μg/ml，R=0.9997.Theaveragerecoveryl，R=0.9999.Theaveragerecoveryethodisconvenient，accurateands

4、atisfyinginseparatingevodiamineandrutaecarpine．Itcanbeusedindeterminationofevodiamineandrutaecarpineintheine；Rutaecarpine；HPLC吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Bench.的干燥近成熟果实，性味辛、苦，热，归肝、脾、胃、肾经，具有散寒止痛、降温止呕、助阳止泻等功能〔1〕。《本草纲目》中说：“茱萸性热，能散能温，苦热能燥能坚，故所治之症，皆取

5、其散寒温中，燥湿解郁之功而已。”目前对吴茱萸有效成分的药理活性研究，主要集中在几种有效成分上，如吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等〔2〕。临床实验表明，吴茱萸生物碱包括吴茱萸碱(Evodiamine)和吴茱萸次碱(Rutaecarpine)等的含量与它的疗效有正相关关系〔3〕，因此研究吴茱萸中生物碱的含量测定有一定的意义。但HPLC直接测定吴茱萸的水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量，不能基线分离。针对此问题，本实验采用碱性氯仿萃取处理样品，HPLC测定其中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。通过测定吴茱萸

6、水提物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量，从而为研究吴茱萸与中药热性的关系提供一定的评价标准。　　1仪器与试药高效液相色谱仪：Agilent1100G1311A四元梯度泵、Agilent1100G1314AVm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-水(49∶51)；检测波长225nm；流速1.0ml/min；进样量20μl；柱温25℃。　　2.2对照品溶液的制备　　2.2.1吴茱萸碱对照品溶液精密称取吴茱萸碱对照品5mg，置25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作母液。精密量取5ml母液至25ml容量

7、瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.04mg·ml-1吴茱萸碱对照品溶液。按“2.1”项的色谱条件进行HPLC分析测定，得到相应的色谱图。见图1。　　2.2.2吴茱萸次碱对照品溶液精密称取吴茱萸次碱对照品5mg，置25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，作母液。精密量取5ml母液至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.04mg·ml-1吴茱萸次碱对照品溶液。按“2.1”项的色谱条件进行HPLC分析测定，得到相应的色谱图。见图2。　　2.3吴茱萸水提物的制备将称得的6623.2g吴茱萸生药材，

8、干燥、去杂质，捣碎，浸泡30min，加10倍量的蒸馏水，浸泡保持微沸1h，第2次加8倍量的蒸馏水，保持微沸1h，合并两次提取液，浓缩至5000ml，即得吴茱萸的水提物。　　2.4供试品溶液制备　　精密称取1.000g吴茱萸的水提物，加水溶解稀释至4ml，加氨水调pH至9.5～10，用氯仿萃取，共萃取3次，15ml/次，合并萃取液并蒸干，甲醇溶解并用25ml容量瓶定容，取一定量，稀释10倍后，过0.45μm微孔滤膜，即得。按“2.1”项的色谱条件进行HPLC分析测定，得