下调长链非编码rna hotair对人宫颈癌细胞增殖转移抑制作用及机制研究

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1、分类号学号２０１３０９６０１００１学校代码１０４８８密级博士学位论文下调长链非编码ＲＮＡＨＯＴＡＩＲ对人宫颈癌细胞增殖转移抑制作用及机制研究学位申请人：学科专业：化学工程与技术指导教师：张志兵张玲答辩日期：２０１８年５月２４日ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofDoctorofPhilosophyinEngineeringTheinhibitoryeffectofdown-regulatingLncRNAHOTAIRonproli

2、ferationandmetastasisinhumancervicalcancercellsanditsmechanismPh.D.Candidate：WangTaoMajor：ChemicalEngineeringandTechnologySupervisor：ZhangZhibingZhangLingWuhanUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei430081,P.R.ChinaMay,2018武汉科技大学研究生学位论文创新性声明本人郑重声明，：所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研宄所取得的成果。除了文中己

3、经注明引用的内容或属合作研宄共同完成的工作外。，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。申请学位论文与资料若有不实之处一，本人承担切相关责任。？论文作者签名？日期：研究生学位论文版权使用授权声明本论文的研宄成果归武汉科技大学所有，其研宄内容不得以其它单位的名义发表。本人完全了解武汉科技大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门（按照《武汉科技大学关于研宄生学位论文收录工作的规定》执行）送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将

4、本论文的全部或部分内容编入学校认可的国家相关数据库进行检索和对外服务。论文作者签名：＿於指导教师签名：＃日期：摘要背景：宫颈癌（Cervicalcancer,CC）是目前已知的在全球范围内主要集中于女性的常见生殖道恶性肿瘤之一。尽管近年来筛查和早期诊断方法有所进步，然而其高发病率和术后低存活率依旧无法解决。包括长链非编码（longnon-codingRNA，LncRNA)HOTAIR在内的许多LncRNAs参与各类肿瘤的发生、发展，且在CC中的异常表达可以作为预诊和诊断生物标记物。然而，其在CC中的作用机制尚不明确。方法：本研究56例宫颈癌病人癌变组织和血浆

5、EGFR、LncRNAHOTAIR和miR-34a表达水平进行RT-qPCR检测分析，收集患者的各项临床病理资料对其HPV16和HPV18含量、年龄、肿瘤尺寸、癌症类型、FIGO临床分期、分化程度与之进行相关性分析;并随访7例高和低表达LncRNAHOTAIR患者生存率；检测原代宫颈正常和癌上皮细胞、人腺癌样细胞SiHa、上皮样细胞HeLa和表皮样细胞Caski等其他细胞系EGFR、LncRNAHOTAIR和miR-34a的表达。设计合成LncRNAHOTAIRsiRNAs，在原代正常宫颈上皮细胞和H8细胞系与原代宫颈癌上皮细胞和Hela宫颈癌细胞系建立沉默模型。运用CCK-8细

6、胞增殖、DAPI染色法、免疫荧光、流式细胞周期和细胞凋亡检测研究LncRNAHOTAIR对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响；借助miR-34a抑制物和LncRNAHOTAIRsiRNAs进行细胞划痕愈合实验、裸鼠异体移植模型、Transwell迁移和侵袭等细胞学实验研究LncRNAHOTAIR和miR-34a对于宫颈癌细胞迁移、侵袭的细胞行为学的影响；结合Westernblot和RTq-PCR技术研究其分子调控机制。结果：通过对56例宫颈癌手术患者癌旁组织和癌组织以及血浆（同时收集56例健康志愿者血浆）检测分析，结合临床病理资料结果，发现LncRNAHOTAIR和EGFR在宫颈癌组织中表

7、达显著升高，miR-34a在宫颈癌组织中表达显著降低，且LncRNAHOTAIR与患者HPV16、18含量、肿瘤体积、EGFR含量具有明显的正相关性，与miR-34a含量具有明显的负相关性；且高表达LncRNAHOTAIR的宫颈癌患者预后存活率更低。宫颈癌原代上皮细胞和细胞系均高表达LncRNAHOTAIR。再者，沉默LncRNAHOTAIR可以显著抑制Hela细胞体外增殖和促I进其凋亡，通过上调miR-34a的表达，进而阻断Wnt/-catenin信号通路。其次，沉默LncRN