研究糖尿病足不同证型血管细胞核增殖相关抗原（ｋｉ６７）表达差

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1、研究糖尿病足不同证型血管细胞核增殖相关抗原（Ｋｉ６７）表达差　　论文糖尿病足中医证型胫后动脉血管细胞核增殖相关抗原临床探究　　论文目的：探索糖尿病足中医辨证分型和血管细胞核增殖相关抗原的表达差异。方法：对32例截肢的糖尿病足患者按中医辨证分为气血两虚瘀阻证、脉络瘀热证、脉络热毒证和气阴两虚瘀阻证，分别对其截肢肢体的胫后动脉应用免疫组化法对细胞核增殖相关抗原（Ki67）的表达进行观察、分析。结果：Ki67的阳性表达和糖尿病足动脉硬化闭塞程度呈负相关，和血管炎症病变程度呈正相关。结论：炎症在糖尿症的

2、大血管病变的过程中起到了重要的功能。　　糠尿病足是糖尿病的严重并发症，据统计1996年全球糖尿病患者1．2亿，预计到2025年，将达到2．5亿以上，而大约15％的糖尿病患者将在其生活的某一时间发生足溃疡或坏疽[1。目前对于糖尿病足病因及发病机制固然还不是完全清楚，但大家公认糖尿病合并大血管病变导致动脉粥样硬化是糖尿病足发病的最主要因素。现将2004年10月～2005年5月间我们收治的32例糖尿病足患者的截肢动脉标本的血管细胞核增殖相关抗原(Ki67)和其中医辨证分型的相关性探究情况报告如下。　　

3、　　1临床资料　　1．1一般资料：32例均为天津医科大学代谢病医院和天津中医学院第一附属医院2004年10月～2005年5月间的住院患者，其中男性24例，女性8例；年龄50～86岁，均匀年龄69．2岁；糖尿病病程最长30年，最短6年，均匀18±2．4年。　　1．2诊断标准：糖尿病足的诊断标准采用2000年中华医学会糖尿病学会第二届糖尿病足会议所制订的“糖尿病足(肢端坏疽)检查方法及诊断标准”。　　1．3截肢标准：参照国际糖尿病足工作组编写的《糖尿病足国际共叫》中有关“大截肢的定义、标准和指标”[

4、2执行。　　1．4中医辨证分型标准：参照《中医外科学(第七版)》及《中药新药临床探究指导原则·脱疽》之中医辨证分型方案分为气阴两虚瘀阻证、脉络瘀热证、气血两虚瘀阻证、脉络热毒证四型。　　　　2观察方法　　2．1标本取材：坏疽截肢标本32例，其中按中医辨证分型气血两虚瘀阻组10例，脉络瘀热组10例，气阴两虚瘀阻组4例，脉络热毒组8例，取各例标本下肢胫后动脉。标本经过10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，备用。　　2．2设备、试剂：美国PENGUIN-600CL自动图像分析系统，细胞核增殖相关抗原(Ki

5、67)抗体PV9000试剂盒DAB购于北京中山生物技术有限公司。　　2．3免疫组织化学法：标本常规石蜡包埋，4μm连续切片，采用PV法进行免疫组化染色，染色过程严格按试剂盒染色程序进行，选取已知的阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。观察细胞核增殖相关抗原(Ki67)，阳性物质呈棕黄色细颗粒状于细胞核表达，采用美国PENGUIN-600CL图像分析系统进行图像分析，选取病变处每500个细胞Ki67的阳性表达率作为其阳性表达指数。统计学处理应用SPSS10．0软件包进行方差分析。　　　　

6、3结果　　3．1中医各证型所占比例以及年龄、性别分布：各证型比例，气血两虚瘀阻组10例（31．25%），脉络瘀热组10　　例（31．25%），气阴两虚瘀阻组4例（12．5%），脉络热毒组8例（25．0%）。年龄、性别分布情况，见表1。　　表132例患者年龄、性别分布n（%）　　性别n50~60岁61~70岁71~80岁80岁以上男24（75．0）4（12．5）8（25．0）11（34．4）1（3．1）女8（25．0）1（3．1）3（9．3）4（12．5）0总计32（100．0）5（15．6）11

7、（34．4）15（46．9）1（3．1）3．2免疫组织化学法观察各证型Ki67表达差异：具体情况见表2。　　表2各证型Ki67阳性表达指数比较（%）　　证型Ki67阳性表达指数脉络热毒4．87±1．01*气阴两虚瘀阻1．86±0．47脉络瘀热1．49±0．13气血两虚瘀阻0．30±0．18注：和气血两虚瘀阻型比较，*P%26lt;0．05。　　气血两虚瘀阻证、脉络热毒证、脉络瘀热证、气阴两虚瘀阻证中均可见部分细胞Ki67呈阳性表达，在脉络热毒证中表达指数最高，气血两虚瘀阻证中表达指数最低，二者比

8、较具有明显性差异(P%26lt;0．05)。　　　　4讨论　　Ki67抗原为细胞核内和细胞***增殖相关的蛋白抗原，分子量为345kd和395kd，其编码基因位于第10号染色体上。Ki67的表达出现于G1中期到晚期，S期和G2期逐渐增加，有丝***期达高峰，***后迅速降解或丢失抗原决定簇，到G0期则不表达，半衰期为lh或更短[3。有人以为它可能是具有蛋白结合特性的重要结构，在有丝***中起着维持DNA规则结构的重要功能[4，是一个反映细胞增殖的敏感指标。　　在糖尿病足的不同辨证分型中气血两虚瘀