染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞skov

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1、染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞SKOV作者：袁鹏，黄艳红，辛晓燕，宋晖，田爽，王德堂【关键词】染料　　binedacellSKOV3　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofgenistEinbinedacellSKOV3.METHODS:ThegroorphologicalalterationsofSKOV3cellsonstratedbyHoechst33342stainingunderafluorescencemicroscopeandapoptosisandcellcycledi

2、stributionetry.RESULTS:Variousconcentrationsofgenisteininbination0.586to0.869,provethegroayberelatedtotheG2/MarrestandthedisturbanceofSphasebygenistein.　　【Keys;drugsynergism　　【摘要】目的：探讨染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌细胞系SKOV3增殖与凋亡的影响.方法：采用MTT比色法检测染料木黄酮和顺铂联用对SKOV3细胞增殖的影响，Hoechst染色荧光显微镜下

3、观察联合用药后细胞形态的改变，流式细胞仪分析细胞周期并检测凋亡率.结果：联用不同浓度的染料木黄酮后顺铂对SKOV3细胞IC50降低率为32.3%~79.8%,两药联合作用系数在0.586~0.869之间，为轻度至高度协同作用.染料木黄酮与顺铂联用可显著提高凋亡率，两药联用诱导SKOV3细胞凋亡和阻滞G2/M期、干扰S期进程，凋亡率与G1期细胞比例呈负相关（rs=-0.953,P<0.05）.结论:染料木黄酮可以增强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用和杀伤作用，两种药物具有协同作用.染料木黄酮阻滞细胞于G2/M期并同时干扰S期进

4、程可能是两药发挥协同作用的重要机制.　　【关键词】染料木黄酮；顺铂；卵巢肿瘤；药物协同作用　　0引言　　近年来染料木黄酮（4，5，7三羟基异黄酮，genistein）对肿瘤生长的抑制作用日益受到重视，尤其是它可以增强常规化疗药物的疗效［1-2］.而染料木黄酮和传统化疗药物顺铂联用能否增强顺铂对耐药卵巢癌的杀伤作用呢？为此，我们研究了染料木黄酮与顺铂联用对耐药卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响及其机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3由西京医院妇产科实验室保存，该细胞系对顺铂等多种药物耐药；

5、RPMI1640培养基(Gibco公司)；新生牛血清(四季青公司)；顺铂(齐鲁制药厂)；染料木黄酮、二甲基亚砜（DMSO）,Hoechst33342(Sigma公司)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)(Amresco公司).细胞周期检测试剂盒为DNAPrepStainkit(BeckmanCoulter公司)；K3型全自动酶标仪(LabsystemsDragon公司)；ELITEESP型流式细胞仪（BeckmanCoulter公司）.　　1.2方法　　1.2.1MTT法检测细胞增殖抑制率取对数生长期的SKOV3细胞，8×103个/孔接种于9

6、6孔培养板，置37℃，50mL/LCO2培养箱培养12h，细胞贴壁后弃去培养液，然后加入含不同浓度药物的培养基200μL：对照组只加RPMI1640培养基(100mL/L小牛血清)；顺铂组加入顺铂浓度分别为0.625，1.25，2.5，5，10，20mg/L的培养基；染料木黄酮组加入染料木黄酮浓度分别为2.5，5，10，20，30，40，50mg/L的培养基；染料木黄酮和顺铂联用组为2.5，5，10，20mg/L的染料木黄酮与顺铂联用，顺铂浓度同单药组，每组均设6个复孔.继续培养至加药后96h，每孔加入MTT(5g/L,20μL),

7、继续孵育4h后弃培养液，每孔加入DMSO150μL，振荡10min，用酶标仪检测各孔吸光值(A490nm)，按以下公式计算：细胞增殖抑制率=（对照组A490nm-实验组A490nm）/对照组A490nm×100%，取6复孔均值绘制抑制率与药物剂量关系曲线，按作图法求出半数抑制浓度（IC50）.同时采用联合作用指数(binedindex，CI)判断染料木黄酮和顺铂联用的性质.CI=DA／ICX,A+DB／ICX,B(A，B代表两种不同药物，ICX,A和ICX,B是两种药物单独使用使生长抑制率达X时的药物浓度，DA和DB是两药联用使生长

8、抑制率达X时两种药物的浓度)［3］.根据Soriano等［4］的判断方法，0.9≤CI≤1.1为叠加作用，0.8≤CI<0.9为低度协同作用，0.6≤CI<0.8为中度协同作用，0.4≤CI<0.6为高度协同作用，0