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1、肝细胞癌中缺氧诱导因子【摘要】目的探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)、热休克蛋白70(heatshockprotEin70，HSP70)在肝细胞癌中的表达及其与癌转移的关系。方法 应用免疫组织化学技术检测48例肝细胞癌中HIF-1α、HSP70的表达。结果 48例肝细胞癌HIF-1α阳性率为70.8%,强表达10例,中度表达14例,弱表达10例,无表达14例,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ-Ⅳ级VEGF阳性细胞数
2、三组比较有显著性差异(P<0.05)。患者癌转移者与无癌转移者HIF-1α、HSP70比较有显著性差异(P<0.01),HIF-2α表达与肝细胞癌恶性程度呈正相关(rr=0.726,,P<0.05)。HSP70与HIF-2α表达呈正相关(r=0.726,P<0.05)。结论 HIF-2α与HSP70表达有相关性,HIF-1α、HSP70与癌转移有关,HIF-α与HSP70联合检测有助于判断肝细胞癌患者的预后。【关键词】肝细胞癌缺氧诱导因子-1α热休克蛋白【Abstract】Obj
3、ective:ToexploretheexpressionofHypoxiainduciblefactor-1α(HIF-1α)andheatshockprotEIn70(HSP70)inhepatocellularcarcinoma,therelationbetetastasis.Method:TheexpressionofHIF-1αandHSP70in48patientsoflivercarcinomamunohistochemicalanalyses.Result:TheHIF-1α-posit
4、iveoutof48patientsediumexpression,10loongⅠ,ⅡandⅢ~Ⅳgradeetastasisthoseetastasis(P<0.01).andtheexpressionofHIF-2αalignantdegree(rr=0.726,P<0.05).TheexpressionofHSP70andHIF-2αetastasis.ThebineddetectionofHIF-1αandHSP70contributetojudgeoftheprognosisof
5、hepatocellularcarcinoma.【Keya,Hypoxiainduciblefactor-1α,heatshockprotein70HIF-1α（Hypoxiainduciblefactor-1α）是1992年发现的一种在缺氧条件下细胞产生的核蛋白,它与靶基因结合,促进其转录,使机体产生一系列缺氧适应反应[1]。现己证实，在任何氧浓度降低的情况下，如全身缺氧、脑动脉阻塞，都可能诱导HIF-1的快速大量表达[2]。肝细胞癌发生后，肿瘤的不断生长、体积增大,血供不足发生缺氧坏死,可诱导HIF
6、-1α过度表达。因此，对以上过程在肝脏中对于下游基因的表达及与癌转移的关系成为近期的研究热点。我们应用免疫组织化学技术对48例肝细胞癌及9例正常肝组织中的HIF-1α、HSP70的表达进行研究，探讨与癌细胞转移、临床预后的关系。1资料与研究方法1.1一般资料 48例肝细胞癌组织取自华中科技大学同济医学院附属同济医院2006.02-2007.05手术切除标本。男28例,女20例。年龄36-71(平均56.0)岁。其中经病理学检查证实伴转移者28例,无转移者20例。按Furhman分级:Ⅰ级18例,Ⅱ级19
7、例,Ⅲ级7例,Ⅳ级4例。9例癌旁正常肝组织(远离肿瘤边缘>5cm)作为对照,并经病理切片证实。1.2免疫组织化学方法测定脑细胞的HIF-1α表达1.2.1主要试剂 鼠抗人HIF-1α(Lot:MS-1164-P0)购自美国NOVUS公司。SP检测试剂盒、DAB检测试剂盒均购自Sigma公司。VEGF检测试剂盒(LOT:D-182)、0.1%EDTA抗原修复液(PH=9.0)、100%山羊血清购自北京中山生物试剂公司。1.2.2主要染色步骤 常规PBS(PH=0.1)代替一抗作为阴性对照。HIF-1
8、α染色步骤:石蜡切片60℃烤箱烤片15min,梯度乙醇脱蜡至水,3%H2O2室温孵育15min,0.1%EDTA150ml微波抗原修复45min,凉至室温,10%血清封闭15min,加入1∶200一抗4℃过夜,生物素化二抗室温孵育35min,加链亲素酶标室温孵育30min,DAB显色10min,脱水,透明,中性树胶封固。HSP70染色步骤:石蜡切片60℃烤箱烤片15min,梯度乙醇脱蜡至水,10mmol0.1%EDTA(PH=9.0)微波抗
