不同抗原致敏树突状细胞对荷瘤大鼠经射频消融后免疫机能的影响

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1、不同抗原致敏树突状细胞对荷瘤大鼠经射频消融后免疫机能的影响作者：文艳玲　罗葆明　智慧　冯霞　杨海云　梁碧玲　【摘要】目的本研究在大鼠ethods38ratsorentalgroup1entalgroup2entand4daysaftertreatment,theCD4+TcellandCD8+Tcelletricanalysis,andCD4+/CD8+ent,ForthedegreeofthedecreaseofCD8+Tcell,thereprovetheantitumorimmunologicalf

2、unctionoftheratsafterRFA.Heat-shockedfreeze-thraoreeffectivelydothatthanun-heat-shockedfreeze-thramunology　　　　在肿瘤治疗当中进一步激发、增强机体对肿瘤的主动免疫反应，有可能在延缓肿瘤生长、杀灭体内微小转移灶或残留癌细胞、防止肿瘤复发和转移等方面起到重要的作用[1-2]。树突状细胞（DCs）是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞，具有强大的激活初始型T细胞的能力，是目前肿瘤免疫治疗的研究热点之一。本研究在荷瘤大

3、鼠实体瘤经射频消融（RFA）治疗后应用不同抗原致敏的DC瘤苗，旨在探讨不同的DC瘤苗对荷瘤大鼠抗肿瘤免疫机能的影响。　　1资料与方法　　1．1实验动物及实体瘤模型的制备　　1．1．1实验动物SD大鼠38只，体质量80~100g，雌雄不限，购自广州中医药大学实验动物中心。　　1．1．2实体瘤模型的制备将-CSF5ng/ml和IL-45ng/ml（R＆D公司），置于培养箱中培养，隔天进行半量换液。收集培养8d的DC行Giemsa’s染色光镜下观察；同时收集DC进行流式细胞免疫学检测表面特异性抗原OX6、OX62

4、和细胞因子CD86、CD80。　　1．2．2DC瘤苗的制备和检验TT法淋巴细胞杀伤试验。1．3实验方法　　1．3．1治疗10%水合氯醛腹腔注射（0．25ml/100g体质量）麻醉大鼠，冷循环射频治疗系统（RadionicsCo．美国）治疗实体瘤，发射功率60Eier法，以Log-ranktest进行组间比较，两样本均数的比较采用t检验，P<0．05为差异有统计学意义。　　2结果　　骨髓来源大鼠DC培养8d后收集，Giemsa’s染色可见细胞形态不规则，细胞表面具有DC的特征性突起，流式细胞仪检测：经

5、冻融抗原致敏DC其OX6+表达率为78．25％、OX62+表达率为86．36％，CD80+为61．52％，CD86+为69．08%。经热休克冻融抗原致敏DC其OX6+表达率为86．24％、OX62+表达率为92．17％，CD80+为70．16％，CD86+为86．21%。　　混合淋巴细胞反应试验表明DC可以诱导同种异体淋巴细胞的强烈增殖，其中热休克冻融抗原致敏DC瘤苗的作用明显高于未热休克冻融抗原致敏DC（P<0．05）；同时，DC瘤苗能诱导有效的CTL反应，其中热休克冻融抗原致敏DC组的细胞毒

6、作用较强，与冻融抗原致敏DC组比较差异有统计学意义（P<0．05）。　　腋下接种5d后大鼠实体瘤二维超声显示为低回声结节，边界清，长径平均约9．47mm；治疗前各组大鼠实体瘤体积比较差异无统计学意义（P>0．05）。　　治疗前后各组大鼠外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值的变化见表1。实验组2外周血CD4+T细胞的升高较实验组1及对照组显著（P<0．05）；实验组1外周血CD4+T细胞的升高较对照组比稍明显，但差异无统计学意义（P>0．05）；治疗后各

7、组荷瘤大鼠外周血中CD8+T细胞均呈下降改变，其中，下降的程度为实验组2>实验组1>对照组（P<0．05）；CD4+/CD8+比值的变化，实验组2的升高与其他两组相比差异有统计学意义（P<0．05）；实验组1的升高与对照组比较差异无统计学意义（P>0．05）。　　　　大鼠荷瘤生存期：对照组：（9．0±1．4）d，实验组1：（13．1±2．8）d，实验组2：（16．6±5．4）d。实验组2>实验组1>对照组（P<0．05）。　　3讨论　　DCs的功能失常在肿

8、瘤对宿主的免疫逃避中起重要作用，通过体外途径获得功能正常的DCs并应用于治疗是当前生物治疗的研究热点之一。既往的研究当中，利用各种技术在体外培养并获得对特殊抗原致敏的DC瘤苗，该类DCs瘤苗在回输体内后，能有效地刺激机体的T细胞增殖，从而在恶性黑色素瘤、肝癌等肿瘤的治疗中取得了一定的疗效[3-4]。其中采用全肿瘤细胞冻融产物在体外致敏DC因其含肿瘤抗原全面，