柴胡有效成分提取工艺的研究

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1、柴胡有效成分提取工艺的研究肖功胜，杨云，孙维英，冯云霞，朱振华【摘要】　　目的确定柴胡有效成分提取的最佳工艺。方法以柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量为指标，采用单因素实验筛选主要因素和水平，再以正交实验筛选柴胡有效成分提取最佳工艺。结果最佳工艺参数为40℃温浸，收集相当于药材2倍量蒸馏液，继用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使挥发油吸收度达0.941，柴胡皂苷a的含量达0.32%。结论该工艺为柴胡有效成分的提取提供了可靠依据，且工艺条件稳定可靠，重复性好。【关键词】提取工艺柴胡皂苷a挥发油正交实验　　Abstrac

2、t：ObjectiveTodeterminetheoptimumtechnologyofactiveingredientsfromBupleurumchinenseDC.MethodsETTLERAE240电子分析天平（瑞士）。　　1.2试药柴胡药材购于河南省药材公司，经本院陈随清教授鉴定为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a对照品自制，经峰面积归一化法测定含量为：99.91%；乙腈为色谱纯；水为双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。　　2方法　　2.1单因素实验　　分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比

3、、蒸馏液收集量等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和水平，同样分别以乙醇浓度、pH值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡皂苷提取的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。　　2.2挥发油的提取和测定方法随机称取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圆底烧瓶中，采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，收集蒸馏液，加3%丙二醇摇匀，精密量取上述蒸馏液2ml两份，一份置5ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为样品液，另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水

4、溶解，转移至5ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为空白。用752紫外分光光度计在277nm波长处测定蒸馏液中挥发油的吸收度。　　2.3柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于500ml圆底烧瓶中，在不同条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液，减压低温浓缩成每毫升含0.5g柴胡的浓缩液，备用。　　2.4柴胡皂苷a含量测定　　2.4.1色谱条件大连伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为乙腈-水37∶63；流速1ml/min；检测波长208nm；柱温35℃；进样量20μl。　　2.4.2对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对

5、照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，配成0.509mg/ml对照品溶液，冷藏备用。　　2.4.3供试品溶液的制备取上述浓缩液10ml减压蒸干，加20ml甲醇溶解残渣，过滤得滤液。再取2ml滤液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冷藏备用。　　2.4.4线性范围考察精密吸取对照品储备液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品溶液进样量X（μl）为横坐标，进行线性回归（n=5），得线性回归方程为Y=209413.7X－162379.

6、4，线性范围为0.9720～9.635μg，相关系数为r=0.9997，线性关系良好。　　2.4.5精密度实验　　精密吸取对照品20μl，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样5次测定，记录峰面积，RSD为1.5%（n=5），表明精密度良好。　　2.4.6稳定性实验　　将供试品溶液在室温下贮存，在“2.4.1”项下色谱条件下，分别于0，2，4，6，8h进样测定，记录峰面积，RSD为2.0%，表明样品在8h内稳定。　　2.4.7重复性实验　　精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样测定

7、5次，记录峰面积，RSD为2.1%（n=5）。　　2.4.8样品测定精密吸取20μl样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算各样品中柴胡皂苷a的含量。　　2.5正交实验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标，参照单因素实验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行L9(34)正交设计，筛选最佳工艺。正交实验因素和水平见表1。表1正交实验因素及水平（略）　　3结果　　3.1浸渍温度对挥发油提取效果的影响分别在30，40，60，80℃温度

8、下浸渍6h，料液比1∶6，提取1次，考察浸渍温度对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.303，0.984，0.758，0.587。由测定结果可知，在40℃下浸渍吸收度达到最大。且变化显