so2致chl细胞氧化损伤及vc保护作用

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1、SO2致CHL细胞氧化损伤及VC保护作用【摘要】目的探讨二氧化硫(SO2)对哺乳类细胞的毒性作用及其防护。方法以SO2体内衍生物-亚硫酸盐和亚硫酸氢盐(分子比为3∶1)及抗坏血酸(维生素C，VC)单独或同时处理中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)，并分别测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质过氧化(LPO)水平。结果(1)SO2体内衍生物单独处理后，CAT活性在12，24h时显著降低；36h时，除5mmol／L组外，其余各组均极显著降低；48h时15，20mmol／L组与对照组比较，差异有统计学意义(P

2、001)。除12h时的5mmol／L组外，其余各组LPO水平在处理12，24h时均明显升高。(2)VC单独处理后，各组CAT活性只在12h时显著升高，同时LPO水平降低，但是只有010，025mmol／L组与对照组比较，差异有统计学意义(P005)。(3)01mmol／LVC和不同剂量SO2衍生物共同处理后，CAT活性仍然呈下降趋势，但加添VC的组CAT活性普遍高于相应的未加VC组，且培养12h的5，10mmol／L组及24h的10，15mmol／L组与未添加VC组比较，差异有统计学意义(P005)；VC也

3、降低了SO2衍生物引起的LPO水平。(4)在CHL细胞中未检测到SOD。结论SO2体内衍生物可以使CHL细胞中CAT活性降低、LPO水平增高，且VC可起到一定防护作用。【关键词】二氧化硫　　SO2被吸收进入体内后，首先在体液中转化成为它的代谢衍生物-亚硫酸盐和亚硫酸氢盐(分子比为3∶1)。SO2对动物和人的作用，实质上是通过这些体内衍生物对组织、细胞及生物大分子的损伤而达到的〔1，2〕。而细胞内许多抗氧化酶活性的改变和膜脂质过氧化的损伤一直被认为是许多毒物的作用机制之一。本室研究表明，SO2吸入可引起大鼠脑组织和红细胞

4、超氧化物歧化酶(SOD)活性下降、脂质过氧化(LPO)作用增高〔3，4〕。SO2与人类健康关系密切，对其毒作用机制及防护研究非常重要。因此，本文研究了SO2体内衍生物对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)中过氧化氢酶(CAT)、SOD酶活性及LPO水平的影响以及抗坏血酸(维生素C，VC)的保护作用。　　1材料与方法　　11实验材料CHL细胞（中国军事医学科学院提供）。　　12细胞培养本实验所用CHL细胞在含5％CO2，37℃恒温箱中培养。用以细胞培养的RPMI1640(美国Gibco公司）培养液中含10％小牛血清，青霉素

5、100Iu／ml，链霉素100μg／ml，传代时以02％胰酶液消化。　　13药物处理　　131SO2衍生物处理细胞传代，培养12h后进行药物处理：对照组5ml／瓶磷酸缓冲液，实验组分别用亚硫酸盐溶液处理，浓度分别为5，10，15，20mmol／L，4h后，弃去处理液。用磷酸缓冲液洗涤细胞，换上新鲜培养液，细胞仍置于5％CO2，37℃恒温箱中培养。分别在12，24h取上清液用于脂质过氧化水平测定；并分别在12，24，36，48h取各组细胞消化，1250r／min离心10min，加入5ml超纯水溶解细胞，置-80℃

6、冰箱中，冻融二次，取出并破碎细胞，进行酶活性测定。　　132VC处理细胞传代，培养12h后进行药物处理：对照组5ml／瓶磷酸缓冲液，实验组分别用不同剂量VC和磷酸缓冲液处理，VC剂量分别为005，01，025，05mmol／L，4h后，弃去处理液。将其分为３组，１组细胞经消化、离心、破碎后立即测定酶活性；另外2组用磷酸缓冲液洗涤细胞，换上新鲜培养液，将细胞置于5％CO2,37℃恒温箱中培养。分别在12，24h取上清液测定脂质过氧化水平，并测定各组细胞酶活性。　　133SO2衍生物和VC处理细胞传代，培养

7、12h后进行药物处理,先用01mmol／L的VC处理15min后，加入不同剂量的SO2衍生物，浓度为5,10，15，20mmol／L，4h后，弃去处理液，分别在12，24h测定脂质过氧化水平和酶活性。　　14CAT活性测定采用过氧化氢(H2O2)分解反应的一级速率常数来测定CAT的活性〔5〕。即在一定的时间间隔Δt内测定H2O2在240nm处的吸光度A1、A2，并用下列公式计算：K/g蛋白质=23／Δt(a／b×lgA1/A2）(Sec-1)。式中：K-速率常数；Δt-时间间隔；a-稀释倍数；b-溶液中蛋白质含量

8、；A1、A2分别-时间t1、t2时的吸光度。　　15SOD活性测定采用改进的VC终止法，420nm测A值〔3，4〕。邻苯三酚自氧化率的A值控制在006～007／min。SOD活性以单位／mg(蛋白质)(U／mgprotein)表示。　　16脂质过氧化作用的测定通过测定硫代巴比妥酸反应物（TBARS)的水平，以1，1,3,3