cmyc脱氧核酶对白血病细胞端粒酶活性的抑制作用

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1、cmyc脱氧核酶对白血病细胞端粒酶活性的抑制作用作者：杨展，赵家明，王旭光,吴平，何惠娟，杨勤【摘要】目的：探讨cmyc脱氧核酶的切割作用及对白血病细胞端粒酶活性的影响.方法：合成针对cmycmRNA的“10～23”型脱氧核酶DzMycI及其类似物DzMycI提取总RNA在细胞外切割cmycmRNA；转染白血病细胞系HL60后，用RTPCR扩增cmyc基因片段和端粒酶蛋白亚基hTERT的片段，用PCRELISA法测定端粒酶活性.结果：脱氧核酶DzMycI在细胞外和细胞内均能够有效地切割cmy

2、cmRNA；在转染HL60后，DzMycI显著抑制白血病细胞生长(P<0.05)，下调端粒酶蛋白亚基hTERT的表达，显著降低HL60细胞端粒酶活性(P<0.05).DzMycI催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzMycI在胞外和胞内均不表现对cmycmRNA的切割作用.结论：脱氧核酶DzMycI确实能够高效特异地切割cmycmRNA，降低白血病细胞端粒酶活性，抑制白血病细胞生长，有可能作为cmyc抑制剂用于白血病的基因治疗领域中.【关键词】催化性DNA；原癌基因蛋白质cm

3、yc；端粒酶；白血病　　【Abstract】AIM：ToexplorethecleavageofcmycmRNAbyaDNAzymeanditseffectontelomeraseactivityinahumanleukemiacelllineHL60.METHODS：A“1023”DNAzyme(DzMycI)targetedagainstcmycmRNAanditsanalogues(DzMycI)ycmRNA.Thecleavingefficiencyandtheexpressionofhuma

4、ntelomerasereversetranscriptase(hTERT)eraseactivityeraseactivity(P<0.01),andinhibitedthegroDzMycIentintheconservedcatalyticmotif,didnotexhibitnotablecleavingeffectoncmycmRNAEitheroutsidethecellsorincells.CONCLUSION：ThesynthesizedDNAzymeDzMycIcancleavecm

5、ycmRNAeraseactivityandinducetheapoptosisofHL60cells.Asneycinhibitors,DNAzymesportantroleinthegenetherapyofleukemia.　　【Keyyc;telomerase;leukemia　　0引言　　脱氧核酶(deoxyribozyme，DNAzyme)是具有酶活性的单链小DNA分子，能够特异切割靶RNA分子［1］.cmyc基因的异常扩增和表达、端粒酶活性的升高与许多恶性肿瘤的发生有关，抑制这两个基因的表达能

6、够促进恶性肿瘤的凋亡［2-6］.本文通过合成针对人cmyc基因的脱氧核酶，在白血病细胞内和细胞外切割cmycmRNA，并观察其对细胞生长和端粒酶活性的影响，研究利用脱氧核酶抑制cmyc表达来进行白血病基因治疗的可能性.　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1细胞及培养条件人白血病细胞系HL60由上海细胞所提供，用含有100mL/L新生牛血清、100kU/L青霉素G和0.1g/L卡那霉素的RPMI1640培养液在37℃，50mL/LCO2的培养箱中培养.　　1.1.2脱氧核酶DzMycI及其类似物D

7、zMycI合成自OligosEtc公司，序列如下：DzMycI：5′TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACGACGTCGCGGi3′(Gi表示倒位连接的G碱基)DzMycI：5′TGAGGGGCAGGCTAGCTACAACCACGTCGCGGi3′(将DzMycI第23位G改为C)DzMycI为经过3′修饰的脱氧核酶，中间的GGCTAGCTACAACGA为脱氧核酶的催化核心，其两端序列为底物结合区，分别与cmycmRNA的起始密码子AUG两旁序列互补，切割位点在起始密码子的A与U碱基之间.

8、脱氧核酶的3′端两个G碱基通过3′3′磷酸二酯键相连接(倒位连接，3′inversion)［7］.DzMycI由DzMycI的第23位G改为C而成.　　1.1.3PCR引物合成自上海生工生物公司.序列如下：GAPDH：(+)5′CTGCACCACCAACTGCTTAG3′；(-)5′TGAAGTCAGAGGAGACCACC3′.扩增片段长度为407bp.cmyc：(+)