灰树花多糖协同化疗药物抗肿瘤作用及其分子机理初探

《灰树花多糖协同化疗药物抗肿瘤作用及其分子机理初探》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、灰树花多糖协同化疗药物抗肿瘤作用及其分子机理初探　作者：陆震宇１，蒲红2，傅荣杰3，韩白衣3Δ【摘要】目的探讨灰树花β多糖在抗肿瘤细胞中的作用和协同化疗药物增加其杀伤肿瘤细胞的作用。另外通过对p53和MDM2的研究，发现了两者协同作用的分子机理。方法用CCK-8方法测定了灰树花β多糖协同化疗药物处理HCT116后的细胞存活率(cellsurvivalrate，CSR)；用PCR的方法测定了p53、MDM2基因的表达。结果(1)灰树花β多糖对肿瘤细胞的直接杀伤作用高于灵芝多糖。(2)灰树花β多糖协同化疗药物增强其对肿瘤细胞的杀伤作用。(3)灰树花β多糖协同化疗

2、药物的分子机理和抑制抑癌基因p53的拮抗物MDM2基因的表达相关。结论灰树花β多糖具有直接杀伤肿瘤作用和化学药物协同抗肿瘤作用。【关键词】灰树花；化疗药物；p53；MDM2【Abstract】ObjectiveTheefficiencyofanticancertherapyislimitedbydrugrEistance.RecentstudiessuggestthatapolysaccharideextractedfromGrifolafrondosaisabletokillcancercellsinvivoandinvitro.Hoolecularbas

3、isforthepolysaccharidefromGrifolafrondosasynergisticeffectsonitouedbyCCK-8kit.p53andMDM2geneexpressioniquantitativePCRanalysisofcellularRNA.ResultsHereGrifolafrondosahadmoregreatanti-cancereffectthanshell-brokensporesofG.luciduminHCT116cell.MoreoverthepolysaccharidefromGrifolafrodo

4、saaybeinvolvedinaugentedthepolysaccharidefromGrifolafrondosainducedHCT116cellssensitivitytoADM-treatment.【Keyotherapeuticdrug；p53；MDM2灰树花(Grifolafrondosa)是一种生长在亚热带至温带的大型药、食兼用珍稀食用菌，又名栗蘑、贝叶多孔菌等，日本称之为“舞茸”。在分类学上属担子菌纲多孔菌科，其口味鲜美、营养丰富，含有众多活性物质，灰树花多糖就是最主要的一类活性成分。灰树花多糖除含有β-1，6-支链β-1，3-葡聚糖外还

5、含有大量高度分支化的β-1，3-支链β-1，6-葡聚糖，研究表明，这种特定的结构使其拥有更强的生物调节活性［６］。作为一种生物反应调节剂(BRM)，灰树花多糖具有增强免疫功能、抑制肿瘤、抗HIV病毒、稳定血压、降低血糖、改善脂肪代谢等广泛的生理活性［１］。灰树花β多糖具有明显的抗肿瘤作用，能激活机体免疫细胞群如T淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞，并可促进多种细胞因子的分泌如IL-2、IL-8、IL-12、γ-INF、TNF-α等，增强肿瘤局部免疫反应，抑制肿瘤发生和转移［２～４］。化疗药物对正常细胞的毒副作用在一定程度上限制了它对恶性肿瘤的治疗作用。1材料与

6、方法1.1细胞培养用10%牛血清(PAALaboratoriesGmbh)DMEM(PAALaboratoriesGmbh)培养液在37℃、5%CO2条件下培养人肠癌细胞系HCT116。1.2细胞毒性分析取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×１０４/ml的单细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔100μlDMEM细胞培养液。5%CO2、37℃环境中培养24h后对HCT116细胞分别用零处理；一天灰树花β多糖(3μg/ml)；一天2μg/ml化疗药物(阿霉素2μg/ml)；二天2μg/ml化疗药物(阿霉素2μg/ml)；第一天2μg/ml化疗药物(阿霉素

7、2μg/ml)、第二天灰树花β多糖(3μg/ml)的五种不同的方法处理，次日每孔细胞中加入5μl的CCK-8试剂，5%CO2、37℃环境中培养2h后，在酶标仪上波长450nm处读取光密度A值，计算细胞存活率(cellsurvivalrate，CSR)。公式1.3统计学处理所有数据均以均数表示，采用t检验。1.4RNA抽提和RT-PCTRNeasykit(Qiagen)提取药物处理过的HCT116细胞总RNA并合成相应的cDNA，分别对p53和Mdm2作RT-PCR，PCR产物通过琼脂糖电泳观察结果。引物序列：p53正5′-GGCCATCTACAAGCAGTC

8、AC-3′，p53反5′-GAGAGGAGCTGGT