灰树花多糖增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性及其分子机理初探

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1、灰树花多糖增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性及其分子机理初探　　　作者：曹卫国，蒋劲松，马韬，赵胜光，韩白衣【摘要】目的探讨灰树花多糖对增强人肿瘤细胞放射治疗敏感性的作用，研究灰树花多糖与X-射线联合使用后细胞凋亡相关基因Bax的mRNA表达水平的变化并探讨两者协同作用的分子机理。方法用CCK-8方法测定灰树花多糖与X-射线联合处理后HCT116的细胞存活率（cellsurvivalrate，CSR）；用ApoptosisLadderDetectionKit进行灰树花多糖与X-射线联合处理后细胞凋亡检测；用RT-PCR方法测定Bax基因的表达。结果(1）灰树花多糖与X-射线联

2、合处理对肿瘤细胞的直接杀伤作用高于X-射线单独处理；(2）X射线与灰树花多糖联合处理时细胞发生凋亡；(3）X-射线与灰树花多糖联合处理后细胞发生凋亡的分子机理与细胞凋亡相关基因Bax的表达提高相关。结论灰树花多糖对肿瘤放射治疗具有明显的增敏作用，联合使用可诱导肿瘤细胞凋亡，此作用可能与凋亡相关基因Bax的表达增加相关。【关键词】灰树花多糖；X-射线；细胞凋亡；BaxAPolysaccharidefromGrifolafrondosaPromotesX-rayinducedcellapoptosisthroughupregulationofBaxinHCT116cells【

3、Abstract】ObjectiveToexploretheefficiencyofthepolysaccharideextractedfromGrifolafrondosa，inenhancingsensitivitytoX-rayirradiationinhumancoloncancercellsHCT116.ThelevelsofBaxmRNAentofthepolysaccharideextractedfromGrifolafrondosabinatedenttodemonstratethemolecularbasisforthesynergisticeffect

4、s.MethodsHCT116cellsurvivalrateonitoredbyCCK-8kit.ApoptosisiquantitativePCRanalysisofcellularRNA.ResultsHereGrifolafrondosaandX-ray，paringtoX-rayalone.Moreover，theeffectofthepolysaccharideextractedfromGrifolafrondosabinedation.oreover，theeffectofthepolysaccharidefromGrifolafrondosabineday

5、beinvolvedinaugmentedthepolysaccharideextractedfromGrifolafrondosainducedHCT116cellssensitivitytoX-rayirradiation.【Keybh）DMEM（PAALaboratoriesGmbh，Hyclone）培养液在37℃，5%ＣＯ２条件下培养HCT116细胞（humancoloncancercells）。1.2细胞毒性分析取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×104/ml的单细胞悬液，接种于24孔细胞培养板。5%ＣＯ２、37℃环境中培养24h后对HCT116细胞分别

6、用：(1）零处理；(2）灰树花多糖(3μg/ml）处理1天；(3）X-射线（4Gy）处理1天；(4）第1天X-射线（4Gy）处理，第2天灰树花多糖（3μg/ml）处理；(5）第1天、第2天都用X-射线（4Gy）处理细胞。X-射线的处理是采用西门子直线加速器12MeV电子线照射。次日每孔细胞中加入20μl的CCK-8试剂（DojindoLaboratories），5%ＣＯ２、37℃环境中培养2h后，在酶标仪（BIO-TEK）上波长450nm处读取光密度A值，计算细胞存活率（cellsurvivalrate，CSR）。细胞存活率（CSR）=试验组A值〖〗对照组A值×100%1

7、.3凋亡检测取对数生长期HCT116细胞，常规消化成2×104/ml的单细胞悬液，接种于3.5cm培养皿。5%ＣＯ２、37℃环境中培养24h后对HCT116细胞采用第1天X-射线（4Gy），第2天灰树花多糖（3μg/ml）的方法处理，对照组零处理。处理48h后，PBS洗涤细胞，用DNA结合染料Hoechst33258（0.5μg/ml）染色，显微镜下观察和计数。随后上述48h处理细胞采用ApoptosisLadderDetectionKit（olecularProbes，Eugene，OR）染色检测。1.4RNA抽提和RT-P