金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响

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1、金克对乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长转移和凋亡的影响【摘要】［目的］观察金克（槐耳清膏）对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。［方法］以MCF?鄄7细胞复制裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型，30只BALB/c荷瘤鼠随机分为对照组（15只）、金克组（15只）。分别用生理盐水（0.2ml/只）和金克(0.2ml/只)连续灌胃30d，观察各组的抑瘤效果及对裸鼠瘤体大小和生存时间的影响。采用光镜、Tunel法行原位凋亡检测、流式细胞术观察肿瘤凋亡的形态学变化。［结果］①金克组肿瘤体积大小明显小于对照组（4.62±1.86cm3，6.35±2.73cm3，P<0.01）；②金

2、克组生存期为明显长于对照组（116.7±28.5d，95.3±26.7d，P<0.01）；③原位凋亡检测移植瘤细胞凋亡指数（AI）明显金克组高于对照组，差异有显著性（19.32%vs8.36%，P<0.01）；④流式细胞术显示金克组凋亡比例与对照组差异有显著性（18.21%vs8.39%，P<0.01）。［结论］金克可抑制人乳腺癌细胞MCF?鄄7移植瘤生长，延长生存期。【关键词】金克乳腺肿瘤移植瘤凋亡金克—槐耳颗粒具有良好的促凋亡效果和免疫增强调节作用，无明显毒副作用。对肝癌、肺癌、食管癌、胃癌等均有独特疗效[1]。本文主要观察金克对乳腺肿瘤生长的抑制作用，对肿瘤

3、细胞凋亡的影响。1材料与方法1．1材料金克（槐耳清膏）由江苏启东盖天力药业有限公司提供。人乳腺癌细胞株MCF?鄄7购于上海生命科学院。细胞培养于含血清培养液中，呈贴壁生长。培养细胞置于37℃、5％CO2培养箱中，每3～5天传代1次。实验动物：健康雌性纯种裸鼠，4~6周龄，体重12g~20g，购自湖北省实验动物研究中心（合格证号：SCXK(鄂)2003?鄄0005），饲养于华中科技大学同济医学院实验动物中心。裸鼠置于恒温层流箱中，于无特定病原体（SPF）环境下饲养，12h光照和12h黑夜交替。喂养符合卫生部颁布的“医学实验动物全价营养饲料标准”。1．2方法人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的建立

4、：人乳腺癌细胞株MCF?鄄7在含10％的胎牛血清及160U/L胰岛素的RPMI?鄄1640培养液中培养，传代扩增，收集对数生长期细胞制备悬液，活细胞浓度为1×107/ml。台盼蓝染色计数活细胞占95％以上。SPF环境下进行实验操作，在每只裸鼠背部皮下接种细胞悬液0.1ml/只（含细胞数约0.5×107个）[2,3]。动物分组及用药：接种4周后，将裸鼠随机分为对照组和金克组。①对照组：15只，采用灌胃法给药，每天灌注0.9％生理盐水0.2ml/只，共30d。②金克组15只，每天灌注药物0.2ml/只，其浓度为150mg/ml，共30d。金克组药物剂量相当于人体正常服用金克剂量根据体表

5、面积比值进行换算折合成裸鼠的剂量[4]。移植瘤生长情况及药物抑瘤效果：给药后每隔3d用游标卡尺测量肿瘤最大长径（a）、横径（b）。计算移植瘤的体积＝（a×b2）/2[5]，绘制移植瘤生长曲线。移植瘤组织病理学观察：取移植瘤用4％多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜观察。裸鼠主要脏器组织学观察：将裸鼠的肝、肺固定，石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察有无脏器转移。生存期观察：待各组裸鼠衰竭时处死或自然死亡，记录死亡时间，按公式计算生命延长率：生命延长率（％）＝（金克组平均存活时间－对照组平均存活时间）/对照组平均存活时间×100％。凋亡指数（AI）：原位凋亡检测Tun

6、el法荧光显微镜下初步分析，光镜下避开坏死区，选10个高倍视野（×400倍）凋亡典型区域，计数1000个细胞，其中阳性细胞数百分比即为AI。流式细胞术：待裸鼠衰竭时处死或自然死亡，剥取肿块，用剪刀取部分瘤块，将瘤组织剪碎，并用0.1MPBS液反复冲洗，用200目金属网过滤成单细胞悬液，离心后去掉上清液，再加入0.1MPBS液冲洗，再离心，去掉上清液，加入70％乙醇1ml，边加边振荡。然后上流式细胞仪（FACScanBectonDickinson，美国），做细胞周期采样分析，检测各组细胞凋亡比例及主要作用细胞分裂的哪个周期。1.3统计学处理结果以均数±标准差表示，采用SPSS12.0

7、统计软件处理，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2．1裸鼠移植瘤生长情况30只裸鼠皮下接种MCF?鄄7细胞悬液10d左右，于接种部位皮下均可触及直径约2mm～3mm的瘤块，致瘤率100％。其后肿瘤逐渐长大，28d后移植瘤长径长至0.8cm左右，再分组给予不同的药物处理，此后每3d检测1次移植瘤最大长径和横径，计算移植瘤体积，裸鼠治疗第30d移植瘤平均体积对照组为6.35±2.73cm3；金克组为4.62±1.86cm3，差异有显著性（P<0.01）。显