caveolin-1调控肝细胞癌血管生成初步研究硕士论文

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1、第二军医大学博十学位论文Caveolin．1调控肝细胞癌血管生成的初步研究摘要肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是世界上最常见的实体恶性肿瘤之一，手术切除和肝移植仍是目前最有效的治疗手段，但疗效不佳，术后复发和转移是其最主要原因。HCC是富血供肿瘤，血管生成被认为与HCC的侵袭转移密切相关，肿瘤细胞与血管内皮细胞之间的相互作用参与了该过程。Caveolin．1是细胞膜上内陷微区域的主要结构蛋白，在肿瘤侵袭转移和血管生成过程中发挥着重要作用。目前，对caveolin．1在不同肿瘤中的作用尚存在着两种完全不同的观点。

2、Caveolin．1最初被认为是抑癌基因，但最近越来越多的研究发现，caveolin．1过表达参与了肿瘤的侵袭转移和血管生成。在有关HCC的研究中发现，下调caveolin．1能抑制不同淋巴道侵袭能力小鼠Hcc的侵袭转移。本研究所前期采用supen哳ay基因芯片技术对HCC转移相关基因进行筛选，发现caveolin．1是重要的促转移候选基因之一。这些研究提示，caveolin．1参与了HcC的侵袭转移和血管生成，但其机制有待进一步阐明。已有研究表明，血管内皮细胞生长因子(vaScularendothelialgrowthfactor，VEGF)

3、是HCC血管生成中最主要的刺激因子，但多数研究caveolin．1与VEGF诱导血管生成之间的关系都集中在内皮细胞上，而对肿瘤细胞上caveolin—l表达是否与VEGF诱导的血管生成有关尚不清楚。基于以上研究背景，本研究采用免疫组织化学和细胞化学、qRT．PCR及Westemblot技术检测HCC组织标本和肝癌细胞株中caveolin．1的表达，并分析caveolin．1与HCC临床病理学因素、VEGF及肿瘤血管生成相关指标(肿瘤微血管密度(MVD)、非成对动脉(UA))之间的相关性；利用慢病毒表达系统构建caveolin．1RNA干扰载体，

4、并借助qRT’PCR、ELISA、侵袭实验和划痕实验分析其对人肝细胞癌株SMMC7721VEGF表达和侵袭、运动能力的影响：利用MTT法和二维凝胶血管生成体外模型探讨下调SMMC772l细胞中caveolin．1表达的培养上清液对人脐静脉血管内皮细胞(hum勰umbilicalveinendotheljalcells，HUvEC)增殖和VEGF诱导的血管生成的影响。主要结果和结论如下：第一部分：Caveolin．1在HCC中的表达及临床意义l、26例伴肝内转移的Hcc组织标本中，癌组织内caveolin．1mRNA表达水平高于正常肝组织、肝硬化

5、组织和癌旁组织，差异均具有统计学意义(P=O．046、O．02l、7第二军医人学博士学位论文O．039)。75例HcC组织标本行免疫组织化学检测显示，量化分析caveolin—l表达强度(P-o．001)、阳性百分比(P=O．002)、计分(P-o．001)均与转移显著相关。Caveolin．1表达强弱与VEGF(卢O．293，P=O．011)、MVD(卢0．36l，P=0．001)、UA(仁O．388，P=O．001)均呈显著正相关。生存分析发现，caveolin．1高表达患者预后比低表达者差(P=O．014)。单变量分析发现，肿瘤大小、门静

6、脉癌栓、肝内转移、caveolin—l表达强弱、VEGF表达水平、MvD和UA都是HCC的重要预后因素；但多变量分析(COX回归模型)发现，只有肿瘤大小和VEGF表达水平是其独立预后因素，而caveolin．1表达水平并非其独立预后因素。2、在HepG2和SMMC772l肝癌细胞株中，免疫细胞化学结果显示，CaveoJin．1在SMMC772l呈强阳性表达，而在HepG2中未见明显表达；W色stemblot检测结果与免疫细胞化学结果一致，且发现在SMMC772l中cave01in．1表达与VEGF高表达呈显著J下相关(仁0．888，P<0．01

7、)；qRT-PCR检测结果显示，SMMC772l细胞中cave01in一1mRNA表达水平明显高于HepG2，差异有统计学意义(P

8、一1的mRNA(敲除率约90％)和蛋白表达。2、沉默Caveolin．1能显著降低SMMC7721细胞内VEGFmRNA表达水平，相对阴性感染对照组下