绍兴地区汉族青少年维生素d受体基因bsmi、tr

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1、绍兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmI、Tr【摘要】目的:探讨维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性的分布情况。方法:随机抽取绍兴地区青少年212名作为研究对象,提取其外周血DNA,利用聚合酶链反应(PCR)、基因测序技术检测VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性。结果:BsmI位点基因型bb、Bb和BB的频率分布分别为89.62%、8.49%、1.89%;Tru9I位点基因型TT、Tt和tt的频率分布为61.79%、

2、33.96%、4.25%;ApaI位点基因型aa、Aa和AA的频率分布分别为60.38%、30.38%、8.96%。结论:绍兴地区汉族青少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点具有多态性。【关键词】受体骨化三醇基因多态性青少年Abstract:Objective:ToinvestigatethedistributionofvitaminDreceptorgeneBsmI,Tru9I,ApaIsitegenepolymorphisminadolescent.Methods:Polymera

3、sechainreaction(PCR)andDNAsequencingtechnologyedtoanalyzetheVDRgenotypein212adolescentsinShaoxingregion.Results:Thefrequencyofbb,BbandBBintheBsmIsiteorphisminthevitaminDreceptorBsmI,Tru9IandApaIsiteinadolescentofHannationalityinshaoxing.KeyinDrecepto

4、r;genepolymorphism;adolescents人类维生素D受体(VitaminDreceptor,VDR)基因位于12号染色体长臂1区3带上,全长约75kb,共有11个外显子和数个内含子[1]。VDR在多种组织中均能表达,在细胞内VDR与1,25(OH)2D3激素信号分子结合成激素-受体复合物,该复合物与靶基因特定DNA序列上的激素反应元件结合,从而对结构基因的表达产生调节。因而VDR本质上是一个配体依赖的转录因子,它与1,25(OH)2D3一起在调节机体钙磷代谢、细胞增殖与分化以

5、及免疫功能等方面起重要作用。本研究利用聚合酶链反应(PCR)和基因测序技术对绍兴地区汉族青春发育期少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点的多态性进行分析,旨在探讨VDR基因型频率的分布,为进一步观察其与青少年的生长发育关系打下基础。1对象和方法1.1研究对象按分层抽样的方法随机抽取212名绍兴地区在校正常学习和生活的青春发育期汉族少年,其中男生90名,女生122名,年龄17~18周岁,平均年龄(17.8±0.5)岁。征得老师与家长同意后,签署知情同意书,抽取全血2~3ml,采用EDTA

6、-K2抗凝备用。1.2研究方法1.2.1基因组DNA提取:全血提取DNA试剂盒由杭州晓逸科技有限公司提供。1.2.2PCR扩增和DNA测序:根据研究需要通过美国NCBI(美国国家生物信息中心)的GeneBank获取VDR基因序列及其相应位点的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)信息。利用Primer5.0软件设计引物序列。引物由上海鼎安生物科技有限公司合成。含BsmI、Tru9I多态性位点PCR扩增的引物I序列为:P1:5'-ATAAGGAAATAC

7、CTACTTTGCTGGTTT-3'P2:5'-TAGGTGCTCAATAAATTGTTGCTAAG-3'扩增参数为95℃预变性5min;95℃变性60s,53℃复性60s,72℃延伸90s,重复35个循环;72℃延伸10min。含ApaI多态性位点PCR扩增的引物II序列为:P1:5'-ACCTAGGTCTGGATCCTAAATGCAC-3'P2:5'-GTTAGGTTGGACAGGAGAGAGAATG-3'PCR反应条件为95℃预变性5min;95℃变性45s,55℃复性45s,72℃延伸9

8、0s,重复35个循环;72℃延伸10min。PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像仪观察结果。PCR产物基因序列经纯化后送北京华大基因进行测序。1.3统计学处理方法各位点等位基因的频率采用直接计算法,并采用Hardy-I、Tru9I多态性位点,长约580bp;由引物II扩增的片段,包含ApaI多态性位点,长约630bp(见图1)。DNA测序结果显示VDR基因第8内含子的+283位点,即BsmI位点存在碱基C/T多态;第8内含子的+443位点,即Tru9I位点也存在碱基C/T多态;第9外显子的

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1、绍兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmI、Tr【摘要】目的:探讨维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性的分布情况。方法:随机抽取绍兴地区青少年212名作为研究对象,提取其外周血DNA,利用聚合酶链反应(PCR)、基因测序技术检测VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性。结果:BsmI位点基因型bb、Bb和BB的频率分布分别为89.62%、8.49%、1.89%;Tru9I位点基因型TT、Tt和tt的频率分布为61.79%、

2、33.96%、4.25%;ApaI位点基因型aa、Aa和AA的频率分布分别为60.38%、30.38%、8.96%。结论:绍兴地区汉族青少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点具有多态性。【关键词】受体骨化三醇基因多态性青少年Abstract:Objective:ToinvestigatethedistributionofvitaminDreceptorgeneBsmI,Tru9I,ApaIsitegenepolymorphisminadolescent.Methods:Polymera

3、sechainreaction(PCR)andDNAsequencingtechnologyedtoanalyzetheVDRgenotypein212adolescentsinShaoxingregion.Results:Thefrequencyofbb,BbandBBintheBsmIsiteorphisminthevitaminDreceptorBsmI,Tru9IandApaIsiteinadolescentofHannationalityinshaoxing.KeyinDrecepto

4、r;genepolymorphism;adolescents人类维生素D受体(VitaminDreceptor,VDR)基因位于12号染色体长臂1区3带上,全长约75kb,共有11个外显子和数个内含子[1]。VDR在多种组织中均能表达,在细胞内VDR与1,25(OH)2D3激素信号分子结合成激素-受体复合物,该复合物与靶基因特定DNA序列上的激素反应元件结合,从而对结构基因的表达产生调节。因而VDR本质上是一个配体依赖的转录因子,它与1,25(OH)2D3一起在调节机体钙磷代谢、细胞增殖与分化以

5、及免疫功能等方面起重要作用。本研究利用聚合酶链反应(PCR)和基因测序技术对绍兴地区汉族青春发育期少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点的多态性进行分析,旨在探讨VDR基因型频率的分布,为进一步观察其与青少年的生长发育关系打下基础。1对象和方法1.1研究对象按分层抽样的方法随机抽取212名绍兴地区在校正常学习和生活的青春发育期汉族少年,其中男生90名,女生122名,年龄17~18周岁,平均年龄(17.8±0.5)岁。征得老师与家长同意后,签署知情同意书,抽取全血2~3ml,采用EDTA

6、-K2抗凝备用。1.2研究方法1.2.1基因组DNA提取:全血提取DNA试剂盒由杭州晓逸科技有限公司提供。1.2.2PCR扩增和DNA测序:根据研究需要通过美国NCBI(美国国家生物信息中心)的GeneBank获取VDR基因序列及其相应位点的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)信息。利用Primer5.0软件设计引物序列。引物由上海鼎安生物科技有限公司合成。含BsmI、Tru9I多态性位点PCR扩增的引物I序列为:P1:5'-ATAAGGAAATAC

7、CTACTTTGCTGGTTT-3'P2:5'-TAGGTGCTCAATAAATTGTTGCTAAG-3'扩增参数为95℃预变性5min;95℃变性60s,53℃复性60s,72℃延伸90s,重复35个循环;72℃延伸10min。含ApaI多态性位点PCR扩增的引物II序列为:P1:5'-ACCTAGGTCTGGATCCTAAATGCAC-3'P2:5'-GTTAGGTTGGACAGGAGAGAGAATG-3'PCR反应条件为95℃预变性5min;95℃变性45s,55℃复性45s,72℃延伸9

8、0s,重复35个循环;72℃延伸10min。PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳,用凝胶成像仪观察结果。PCR产物基因序列经纯化后送北京华大基因进行测序。1.3统计学处理方法各位点等位基因的频率采用直接计算法,并采用Hardy-I、Tru9I多态性位点,长约580bp;由引物II扩增的片段,包含ApaI多态性位点,长约630bp(见图1)。DNA测序结果显示VDR基因第8内含子的+283位点,即BsmI位点存在碱基C/T多态;第8内含子的+443位点,即Tru9I位点也存在碱基C/T多态;第9外显子的

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