兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛诱导海马组织p38

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1、兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛诱导海马组织p38【关键词】脑血管痉挛　　Phosphorylationofp38MAPKinrabbithippocampusduringcerebralvasospasmfolloentalsubarachnoidhemorrhage　　【Abstract】AIM:Toobservethetemporalchangesofp38MAPKanditsphosphorylationstatusinhippocampusaftercerebralvasospasm(CVS)folloorrhage(SAH)andtoinvestigatethemolecularm

2、echanismsofbraininjuryinducedbyCVS.METHODS:APKproteininhippocampuskeptunchangedafterSAH.Buttheexpressionofpp38MAPKproteinincreasedinhippocampus1dayafterinjury,reachedthepeakatday4andremainedrelativelyhighlevelatday7,alcontrolgroup(P<001).CONCLUSION:Thepresentresultssuggestthattheactivationofp38

3、MAPKsignalpathaycloselyrelatedtotheCVSinducedhippocampusinjuryfolloorrhage;cerebralvasospasm;p38MAPK;blotting,pus　　【摘要】目的:观察蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）模型中海马组织内p38MAPK及其磷酸化的时相变化特点，初步探讨CVS导致缺血性脑损伤的分子机制.方法:用APK和磷酸化p38MAPK(pp38MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38MAPK在SAH组各时间点的海马组织内的表达保持相对恒定，与正常对照组相比无明显变化（P>005）.pp38MAP

4、K的表达水平在SAH组1d时即有明显升高，4d时达到高峰，7d时仍维持较高的表达水平，与正常对照组相比有显著差异（P<001），分别是其在正常组海马组织中表达水平的31，79和62倍.结论:p38MAPK信号通路的激活可能与SAH后CVS所造成的海马神经元的损伤有密切关系.　　【关键词】蛛网膜下腔出血；脑血管痉挛；p38MAPK；印迹法，海马　　0引言　　丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivatedproteinkinase，MAPK）途径是细胞外信号引起细胞核反应的共同通路.p38MAPK是MAPK家族的3个主要成员之一，多种细胞外刺激如应激、细胞因子以及G蛋白偶联受体的激

5、活等均可导致p38MAPK的磷酸化，从而激活p38MAPK信号通路［1,2］.在神经系统p38MAPK存在于大脑皮质、海马、小脑及脑干等脑区的神经核团，参与神经系统不同区域的生理功能［3］.有研究表明，p38MAPK通路与包括脑缺血、缺氧等多种因素所导致的脑损伤有密切关系.我们采用兔枕大池2次注血法建立脑血管痉挛（cerebralvasospasm,CVS）动物模型［4,5］，模拟临床上蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）所致的CVS，利用APK蛋白的表达以及其磷酸化的时相变化，以探讨SAH后CVS导致缺血性脑损伤中p38MAPK的作用，为临床上有效防治C

6、VS引起的脑损伤提供依据.　　1材料和方法　　11材料新西兰白兔12只，雌雄不拘，体质量26～32kg，由本校实验动物中心提供.小鼠抗p38MAPK积小鼠抗磷酸化p38MAPK(pp38MAPK)单克隆抗体购自美国SantaCruz公司；山羊抗βactin多克隆抗体购自美国Chemicon公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗小鼠或山羊二抗购自Chemicon公司；ECL化学发光试剂盒、PVDF膜及Hyperfilm胶片购自美国Amersham公司；蛋白质提取及浓度测定试剂盒购于美国BioRad公司.　　12兔SAH后CVS兔模型的建立兔随机分成两组：SAH组（n=9）和正常对照组（n=3

7、）.SAH组动物im速眠新（846合剂），02～03mL/kg，监测血压、呼吸及心率.将兔固定于操作台上，枕部剃毛，常规碘酒、乙醇消毒、铺巾.于枕部中线作一直切口，长25cm，切口正中为寰枕交界部.锐性分离直达寰枕筋膜.使兔下颏内收，充分显露寰枕部，用18G套管针与躯体成角约30℃穿刺枕大池，进针约1cm，体会到突破感后，退出针芯，此时可见清亮脑脊液（CSF）流出.取股动脉的非抗凝血25mL，缓慢注入枕大池内.退出套管针