裸鼠荷人卵巢癌移植瘤模式建立及药效研分析和基因突变检测

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1、裸鼠荷人卵巢癌移植瘤模式建立及药效研分析和基因突变检测引言研究现状、成果恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，近年来其发病率明显上升[1，2]。我国已步入肿瘤高发国家行列。卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，死亡率位居妇科恶性肿瘤之首，严重威胁着妇女的健康与生命[3_5]。上皮性卵巢癌是最常见的卵巢恶性肿瘤，由于缺乏有效的筛查手段以及发病初期症状、体征较为隐蔽，大多数患者在确诊时已属晚期。较高的复发率及化疗耐药性使卵巢癌患者5年生存率仅为20-30%[4_6]。因此，如何改善卵巢癌患者的预后、延长其生存期是临床医生面临的困境之一。目前对上皮性卵巢癌的治疗原则仍以手术

2、为主，辅以化疗等综合治疗。对于晚期卵巢癌而言，肿瘤细胞减灭术是临床常用的手术方式，但术后患者的预后受多种因素如转移、对化疗药物的敏感性等影响。19世纪80年代，顺怕的问世在一定程度上提髙了卵巢癌患者的生存率。虽然目前出现多种抗癌新药，但《2010NC卵巢癌临床实践指南》仍推荐以钻类药物为基础的联合化疗方案，PT(销类和紫杉醇类药物）为一线化疗方案，还没有一种药物能够取代钿类药物在上皮性卵巢癌化疗中的地位。卵巢癌患者接受了多疗程化疗后，会出现肿瘤细胞对化疗药物耐药，少数患者甚至一开始就对化疗药物耐药，从而导致临床疗效不佳，肿瘤进展直至患者死亡[8_9]。因此，寻找新的治

3、疗勒1点、研发新药是我们急需解决的问题之一，而常规检测耐药基因及确定祀向药物所针对革巴点的表达情况，则是合理选取有效药物的前提。动物肿瘤模型是研究上述课题的有效手段，同时也可用于研究肿瘤发生机制及抗肿瘤药物的临床前蹄选。动物肿瘤模型可分为：自发性肿瘤模型、诱发性肿瘤模型、基因修饰肿瘤模型和移植性肿瘤模型。自发性肿瘤动物模型是指实验动物未经有意识的人为处理，在自然情况下发生的肿瘤，主要发生于近交系动物；由于长期近亲传代，个体差异较小，与人类遗传性肿瘤发生相似，主要用于肿瘤发生机理的研究，理论上讲是很理想的动物模型，但该模型存在成瘤时间长等缺点。诱发性肿瘤动物模型是在实验

4、条件下将致癌因素与动物特定部位直接或间接接触，诱发动物发生肿瘤；其基本原理是利用外源性致癌物引起细胞遗传特性发生改变，导致肿瘤发生；该模型易于操作，紀器官和诱癌剂恒定，成瘤率高，基本模拟了癌变发生的过程，是一种较好的动物模型，常用于肿瘤病因学及癌变过程的研究，但该模型也存在诱发时间长、肿瘤浸润和转移能力低等缺点。基因修饰肿瘤模型应用生物学技术使基因组发生改变，从而导致肿瘤发生，主要用于肿瘤发生机制的研究；移植性肿瘤动物模型指将动物或人体肿瘤移植到同种或异种动物体内而形成的肿瘤，是目前应用较广泛的模型，可分为同种移植和异种移植；前者主要是指在同系动物身上移植，后者主要是

5、指将人体肿瘤组织接种到免疫缺陷动物体内，该模型传代后动物成瘤率稳定，均一性好，比自发性和诱发性肿瘤动物模型省时省力，更易实施，主要用于药效学研究。该模型也能更准确地反映肿瘤的生物学特性，在体内的病理生理过程及药物经活体代谢后对肿瘤的影响[19]。一般给予受试药后，通过对动物一般状况、体重、肿瘤生长情况、肿瘤体积及瘤重的观察，可以判断受试药物是否有抑瘤作用。令人遗憾的是没有一种模型能完全满足研究者的需要，研究者只能根据试验目的选择合适的动物模型。人体肿瘤异种移植瘤模型以免疫缺陷动物作为载体，基本保持了原有的生物学特性。该模型的建立经历了三个发展阶?段：动物体内免疫缺陷部

6、位接种、人工诱导免疫缺陷动物及基因改良培育自身免疫缺陷动物[11]。Balb/c-nu裸鼠是目前移植性肿瘤动物模型中使用较多的免疫缺陷动物之一，该鼠无毛、无胸腺，由于缺乏成熟T细胞的辅助、抑制和杀伤功能，因而细胞免疫功能低下，不能执行T细胞功能，异种移植的排斥反应较低，为肿瘤学的研究提供了难得的模型材料，使移植性肿瘤研究进入了一个新时期，因此，裸鼠有肿瘤试验的活试管之称[12-13]。1969年Rygaard和Povlsen将人结肠癌组织接种于裸鼠皮下，首次成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。至今几乎所有的肿瘤均能在裸鼠体内移植成瘤，研究较多的是结肠癌、恶性黑色素瘤

7、和恶性淋巴瘤[9，14]。由于裸鼠移植瘤在组织病理形态学、生物学特性及对化疗药物的敏感性等方面与其原发的肿瘤相似因此，裸鼠移植瘤模型是目前肿瘤学研究中较为理想的动物模型。最常用的接种部位是皮下，皮下接种具有直观性，移植瘤不与皮肤和皮下组织粘连，极易分离便于观察，可随时监测肿瘤的生长，绘制生长曲线，而且成瘤率相当高。目前临床上常用的抗肿瘤药物大多是首先经裸鼠移植瘤模型蹄选而发现的。一、裸鼠荷人卵巢癌移植瘤模型的建立研究目的卵巢恶性肿瘤具有多种组织学类型，各种类型的发生率存在明显差异，其中上皮性卵巢癌最常见。由于卵巢癌早期缺乏特异的临床症状及蹄查手段，发