恶性疟原虫msp1

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1、恶性疟原虫MSP1：张忠广，常志尚，赵恒梅，宫玉香【关键词】疟原虫［摘要］目的构建恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量1.9万片段（MSP119）毕氏酵母真核表达克隆。方法利用PCR技术扩增出MSP119，插入pPIC9载体中，鉴定正确的MSP119基因，插入毕氏酵母分泌型表达载体pPIC9k中，DNA测序鉴定序列的正确性，转化酵母细胞。结果筛选出的阳性克隆为MSP119表达克隆。结论用分子生物学方法重组构建的MSP119毕氏酵母真核表达克隆，为高效表达MSP119及其活性鉴定奠定了基础。［关键词］基因，MSP119；基因扩增；疟原虫，恶性

2、；毕氏酵母；真核表达；聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveToconstructMSP119geneeukaryoticexpressionclonesinpichiapastoris.MethodsMSP119genesplifiedbyPCRtechniquefromrebinantvectorpPIC9/PFCP2andinsertedintocloningvectorpPIC9.RebinantexpressionvectorsedbyautomaticDNAsequencing.Byusingelectroporationtra

3、nsformation,rebinant　　恶性疟原虫MSP1：张忠广，常志尚，赵恒梅，宫玉香【关键词】疟原虫［摘要］目的构建恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量1.9万片段（MSP119）毕氏酵母真核表达克隆。方法利用PCR技术扩增出MSP119，插入pPIC9载体中，鉴定正确的MSP119基因，插入毕氏酵母分泌型表达载体pPIC9k中，DNA测序鉴定序列的正确性，转化酵母细胞。结果筛选出的阳性克隆为MSP119表达克隆。结论用分子生物学方法重组构建的MSP119毕氏酵母真核表达克隆，为高效表达MSP119及其活性鉴定奠定了基础。［关键词

4、］基因，MSP119；基因扩增；疟原虫，恶性；毕氏酵母；真核表达；聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveToconstructMSP119geneeukaryoticexpressionclonesinpichiapastoris.MethodsMSP119genesplifiedbyPCRtechniquefromrebinantvectorpPIC9/PFCP2andinsertedintocloningvectorpPIC9.RebinantexpressionvectorsedbyautomaticDNAsequencing.Byu

5、singelectroporationtransformation,rebinantexpressionvectorscontainingMSP119genesedintopichiaGSll5cells.ResultsThepositiveclonesolecularbiologyisthebasisofMSP119expressioninpichiapastoris.［KEYSP119;geneamplification;plasmodiumfalciparum;eukaryoticexpression;pichiapastoris;polymer

6、asechainreaction随着分子生物学技术的发展，基因工程疫苗的研制已成为当今世界性热点课题。毕氏酵母表达系统既具有原核表达系统能高效表达外源蛋白的特点，又具有真核生物的翻译后加工功能，使表达的外源蛋白具有生物学活性［1］，所以构建酵母表达克隆意义重大。本文选择恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量19×103片段（MSP119）的编码序列为目的基因，与酵母表达载体pPIC9k进行重组构建，经酶切鉴定后获得MSP119的真核表达克隆。现报告如下。1材料与方法1．1材料及大肠杆菌(Escherichiac01)DH5a，毕氏酵母(Pic

7、hiaPastoris)GSll5组氨酸缺陷型表达菌株，pPIC9(8023bp,ColElori,AmpR)、pPIC9k(9276bp,ColElori,AmpRkanR)，均购自美国Invitrogen公司。质粒pBluescriptks+(2960bp，ColElori，Amp+)为实验室保存；pBKS／PFCP质粒为实验室保存。限制性内切酶购自BioLabs；T4DNA连接酶，TaqDNA聚合酶购自MBI公司；DNAMarker购自Promega公司。1．2引物设计与合成为便于目的蛋白纯化，在下游引物5′端加6个His基因，设计引物如下：上游

8、引物P1：5′CCGCTCGAGAAAAGATTACAAATTTCTCAACATC3′；下游引