探究热药吴茱萸对利血平所致虚寒证大鼠肝脏能量代谢相关机制的影响

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1、探究热药吴茱萸对利血平所致虚寒证大鼠肝脏能量代谢相关机制的影响热药吴茱萸对利血平所致虚寒证大鼠肝脏能量代谢相关机制的影响论文导读：本论文是一篇关于热药吴茱萸对利血平所致虚寒证大鼠肝脏能量代谢相关机制的影响的优秀论文范文,对正在写有关于引物论文的写有一定的参考和指导作用,ammRNA表达量变化不明显；吴茱萸生药2.1g·kg1能明显升高虚寒证大鼠ST3及RCR，显著降低P/O，明显升高Pgc-1αmRNA表达量和升高Nrf1mRNA表达量的趋势，对Cox4，Atp5b，Ucp2，TfammRNA表达量无明显影响

2、。结论：吴茱萸可能通过推动Pgc-1αmRNA和Nrf1mRNA的表达，调节线粒体呼吸链中Cox4，Atp5bmRNA表达量，增加线粒体呼吸功能及氧化[摘要]目的：探讨热药吴茱萸对虚寒证大鼠肝组织线粒体能量代谢相关机制的影响。策略：大鼠皮下注射利血平造模，经吴茱萸灌胃给药12d后，氧电极法测定肝线粒体的呼吸效率；RT-PCR法测定肝组织Cox4，Atp5b，Ucp2，Pgc-1α，Nrf1，TfammRNA的表达量。结果：吴茱萸生药4.2g·kg1能显著升高虚寒证大鼠ST3及RCR，明显增加Cox4，Ucp2

3、，Nrf1mRNA表达量，亦有升高Atp5b，Pgc-1αmRNA表达量的趋势但无统计学作用，TfammRNA表达量变化不明显；吴茱萸生药2.1g·kg1能明显升高虚寒证大鼠ST3及RCR，显著降低P/O，明显升高Pgc-1αmRNA表达量和升高Nrf1mRNA表达量的趋势，对Cox4，Atp5b，Ucp2，TfammRNA表达量无明显影响。结论：吴茱萸可能通过推动Pgc-1αmRNA和Nrf1mRNA的表达，调节线粒体呼吸链中Cox4，Atp5bmRNA表达量，增加线粒体呼吸功能及氧化磷酸化效率。吴茱萸还可

4、能通过增加Pgc-1α，激活肝脏中Ucp2mRNA的表达使线粒体解耦联呼吸增强，产热增加。　　[关键词]吴茱萸；寒热药性；能量代谢；Ucp2；Cox4；Atp5b；Pgc-1α；Nrf1　　中药的寒、热药性与机体能量代谢的关系密不可分，寒热中药可能通过影响能量代谢的某些环节，实现对寒热证的调节。前期研究发现，寒证大鼠能量代谢明显降低[1]，而吴茱萸等热性中药可推动大鼠肝脏能量代谢[2]，但其影响能量代谢的作用环节与作用机制尚不明确。本文通过观察典型热性中药吴茱萸对利血平所致虚寒证大鼠肝脏肝组织线粒体呼吸效率及

5、与能量代谢相关因子表达，旨在找出热性中药影响能量代谢的相关机制，为药性的科学评价奠定实验基础，更好地指导中药的临床运用。　　1材料　　1.1药材及样品制备吴茱萸购自北京鹤元堂医药科技有限公司，批号200810003，经江西中医学院付小梅副教授鉴定为芸香科植物吴茱萸Evodiarutaecarpa（Juss.）Benth.干燥近成熟果实。吴茱萸水提液由本实验室制备，取一定量吴茱萸加10倍量水浸泡60min，回流提取60min，倒出药液，残渣再加入8倍水，回流提取60min。合并2次药液滤过、浓缩后制成生药0.4

6、2g·mL-1吴茱萸水提液，-20℃放置备用。　　1.2动物SD雄性大鼠，300～320g，由湖南斯莱克景达动物有限公司提供，合格证号SCXK（湘）2009-0004。　　1.3药品与试剂利血平注射液（广东邦民制药厂有限公司，批号090512）；牛血清蛋白（BSA，南京建成生物工程研究所，批号20090716）；线粒体提取试剂盒（碧云天生物技术研究所，批号090728）；JanusgreenB（上海蓝季科技发展公司，批号081022）；SYBRPremixExTaq[宝生物工程（大连）有限公司，批号BK990

7、4]；Trizol（Invitrogen公司，批号1382739）；反转录试剂盒（Fermentas公司，批号00033699，00044977）；Agarose（BIOBASICINC，LJ0605B1008J）；荧光定量PCR试剂盒（TaKaRa公司，批号BK8803）；DEPC（Amresco，批号E174）；TRIS（Amresco，批号T8060）；氯仿（天津永大化学试剂有限公司，批号20060310）；异丙醇（天津永大化学试剂有限公司，批号20081212）；pEASYTM-T3克隆试剂盒（北京全

8、式金公司，批号D10420）。　　1.4引物设计所用引物通过引物设计软件oligo6自行设计，序列如下：β-actin（NM_031144）上游引物5′-TGGGTATGGAATCCTGTG-3′，下游引物5′-GTGTTGGCATAGAGGTCTTT-3′；解耦联蛋白色（Ucp2，NM_019354）上游引物5′-AGGTAGCAGGAAGTCAGAAT-3′，下游引物5′-TAGAGGGAAAG