辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应

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1、辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应作者：杜维霞，傅颖华，陈德清【摘要】目的探讨不同照射方式对不同细胞系所产生的旁效应。方法采用人正常淋巴（NL）细胞系和人慢性髓细胞白血病（K562）细胞系，60Coγ射线分别照射细胞和照射培养液；照射方式分为2.0Gy一次照射及2.0Gy（1.0Gy×2）分两次照射，两次照射间隔时间为2h，照射剂量率为1.0Gy/min。结果2.0Gy一次照射和2.0Gy(1.0Gy×2)分两次照射的单纯照射培养液组的凋亡细胞发生率T检验显著高于未照射的对照组（P<0.05);辐射诱发人NL凋亡细胞发射率显著高于人K

2、562细胞。结论单纯照射的培养液同样可以诱发凋亡细胞发生率增加；不同的细胞系在辐射诱发的旁效应存在差别。【关键词】电离辐射；辐射诱发旁效应；凋亡电离辐射诱发旁效应在20世纪90年代初期首先被Nagasain，照射技术及照射条件由本所二级标准实验室提供。1.1.3凋亡细胞检测凋亡细胞检测试剂盒由北京宝赛生物技术有限公司生产。流式细胞仪由美国BD公司生产，型号为FACSAria,所用的软件FACSDiva。1.2方法1.2.1细胞培养两种细胞相同条件下培养，用RPM1640培养液，加10%胎牛血清，37℃、5%CO2培养，隔天换培养液1次，细胞生长良好

3、后，更换培养液后次日照射，细胞数约为1×106左右，25cm2培养瓶加入5ml培养液。1.2.2照射条件实验用60Coγ射线照射2.0Gy一次照射，2.0Gy分两次照射（1.0Gy×2），照射后立即放回37℃培养箱继续培养；二次照射的细胞，2h后，按同样方法处理。1.2.3细胞分组将NL和K562两种细胞分别进行2.0Gy一次照射、2.0Gy分次照射（1.0Gy×2），各分为7组，未照射的正常对照组，细胞和培养液完全照射组，提取培养液照射组（照射后的细胞悬液在60min内，用10ml注射器吸出，连接在0.2μm过滤漏斗过滤细胞，将照射的培养液加入到

4、未经照射的细胞中）和50%细胞和培养液（照射的细胞悬液等比例加入到未照射的细胞悬液中）照射组，37℃、5%CO2培养箱继续培养。1.2.4凋亡细胞检测分别于照射后的24、48和72h进行凋亡细胞检测，检测方法按照AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒的说明书进行操作，调整细胞浓度至1×１０6左右，PBS洗2次，低温低速离心10min，用尼龙布过滤，尽量使细胞悬液中的细胞成单个细胞，将细胞悬浮于缓冲液中，上机前30min加入荧光探针（AnnexinV-FITC)和碘化丙啶（propidiumiodide)染料，闭光4℃反应30min后加入缓冲液（b

5、indingbuffer),充分振荡混匀上机检测，用软件FACSDiva计算凋亡细胞率，为了避免其他混杂因素，本次实验只计数早期凋亡细胞率，除去晚期凋亡细胞和死亡细胞。该实验在相同条件下重复2次，每个检测点检测3瓶细胞，求出3次检测早期凋亡细胞率的平均值。1.2.5数据统计分析各组凋亡细胞发生率采用照射组与未照射组之间进行比较，2.0Gy一次照射和2.0Gy（1.0Gy×2）分两次照射之间比较，以及两种细胞系凋亡细胞发生率，采用相同照射条件组之间比较，都采用t检验。50%细胞照射组凋亡细胞发生率的预期值的计算是用完全照射组凋亡细胞发生率加上正常对照

6、组凋亡细胞发生率后，再除以2，计算50%细胞照射组凋亡细胞发生率的预期值。2结果细胞照射后不同时间，取出不同组的细胞，经过前处理后上机，检测凋亡细胞发生率，观察在照射后不同时间凋亡细胞发生率。2.1NL细胞2.0Gy照射后，24和48h，早期凋亡细胞发生率各组与对照组相比都有所增加，特别是提取照射细胞的培养液组在照射后24h和48h与未照射的对照组比较差异有显著性；各时间点的50%细胞照射组早期凋亡细胞发生率都高于预期值（完全照射组凋亡细胞发生率的50%+未照射对照组凋亡细胞率的50%）；而72h后只有完全照射组显著高于未照射对照组；另外两组的凋亡

7、细胞发生率与未照射的对照组间比较差异均无显著性。2.2正常人淋巴（NL）细胞1.0Gy×2照射后24h和48h凋亡细胞发生率都比对照组有所升高，t检验与对照组之间比较差异有显著性；同样，24h和48h的50%细胞照射组早期凋亡细胞发生率都高于预期值；另外，只有照射后72h的完全照射组与未照射的对照组t检验差异有显著性。表160Coγ射线2.0Gy和1.0Gy×2照射正常淋巴（NL）凋亡细胞发生率注：照射组与未照射对照组之间*P<0.05;照射组与未照射对照组之间ΔP<0.012.3正常人淋巴细胞（NL）在相同照射剂量，不同照射方式采用一

8、次2.0Gy一次照射和2.0Gy（1.0Gy×2）分两次照射之间的比较结果显示：各组之间差异均无显著性，包括总凋亡发生率差