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时间:2018-11-10
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1、胆固醇结石与载脂蛋白B基因多态性的关系 【摘要】 目的 探讨胆固醇结石病与载脂蛋白(Apo)B基因多态性的关系。方法 选择载脂蛋白B基因多态位点XbaⅠ、EcoRⅠ应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对101例胆固醇结石病人和50例对照者进行研究。结果 胆固醇结石组X+等位基因频率显著高于对照组(P<0.05),具有X+等位基因者其血脂总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)及ApoB水平显著高于非X+者(P<0.01);胆固醇结石组和对照组在EcoRⅠ等位基因频率和血脂水平方面差异均无显著性(P>0.05)。结论 X+等位基因可能是胆固
2、醇结石的易感基因。 RelationshipbetorphismsoftheapolipoprotEinBgeneandcholesterolgallstonedisease 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetorphicsitesXbal,EcoRIandcholesterolgallstonedisease.Methods TorphicsitesXbal,EcoRIofApoBgeneerasechainreactionandrestrictionfragmentlengthpolymorphismt
3、echnique101patientsthoseightnbsp;bethesusceptiblegeneforcholesterolgallstonedisease. 【Keyorphism 我们选取载脂蛋白(Apo)B基因XbaⅠ、EcoRⅠ多态位点应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术研究其等位基因频率在正常人和胆固醇结石病人中的差异及其对血脂代谢的影响,从基因水平探讨胆固醇结石病的发病原因,现将结果报道如下。 材料和方法 1.对象:本院外科1996年4~8月行选择性胆囊切除术的胆囊结石患者110例。酶法测定结石胆固醇含量,胆固醇含量≥5
4、0%的101例为胆固醇结石病例组,其中男42例,女59例,平均(51.3±1.4)岁;以同期非胆石病住院的50例(B超证实无胆结石)为对照组,其中男21例,女29例,平均(49.2±2.9)岁。研究对象均无肝肾疾病、糖尿病和冠心病。 2.方法:(1)基因组DNA抽提:抽取10ml空腹静脉血,用酚-氯仿法抽提DNA。采用美国Gibco-Brl公司基因组DNA抽提试剂盒提供的方法进行操作。(2)基因多态性分析:①按Boermol/LMgCl25μl,2mmol/LdNTP5μl,20pmol/L引物各1μl,模板DNA0.4μg,Taq聚合酶2U,加灭菌去离子水至总反应体积50
5、μl。反应条件:95℃预变性5min。继之95℃变性1min,58℃退火1min,72℃延伸1.5min,为1个循环。共30个循环,最后1个循环再延伸7min。用2%琼脂糖凝胶(含0.5g/L溴乙锭)电泳,鉴定上述产物。③限制性内切酶酶切反应:在XbaⅠ和EcoRⅠ多态位点的PCR扩增产物中分别加入对应的限制性内切酶20u(Promega公司生产),37℃消化4h。然后以2%的琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物。(3)血脂分析:酶法测定血清总胆固醇(TC),血清总甘油三脂(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c);ELISA法检测血清脂蛋白(a)[L
6、p(a)],载脂蛋白A(ApoA)和ApoB。以上指标均用临床生化自动分析仪测定。 3.统计学方法:计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。 结果 1.酶切产物电泳结果:存在XbaⅠ酶切位点者酶切后显示433bp和277bp2条片段,缺乏该酶切位点者仅有1条710bp片段。相应有3种基因型:X+X+、X+X-、X-X-;存在EcoRI酶切位点者酶切后显示253bp和227bp2条片段,缺乏酶切位点者仅显示1条长480bp的片段。相应有3种基因型:E+E+、E+E-、E-E-。 2.少见等位基因频率:X+等位基因频率结石组显著高于对照组(P<0.05)。E-等位基因频
7、率结石组与对照组差异无显著性(P>0.05)。 3.血脂水平比较:结石组TC、TG、HDL-c和ApoB水平显著高于对照组。结石组X+X-基因型者血浆TC、LDL-c、ApoB水平显著高于X-X-基因型者,对照组中X+X-与X-X-基因型者血脂水平差异虽无显著性,但却表现为X+X-基因型者TC、LDL-c、ApoB水平增高趋势。而EcoRI各基因型间血脂水平差异无显著性(P>0.05)。 讨论 EcoRI位点的多态性主要是由ApoB基因4154位上的密码子突变(Lys→Glu)形成的,从我们实验结
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