资源描述：
《端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响作者：石梅，易军,凌瑞，宫卫东，付莉【关键词】甲状腺肿瘤；,寡核苷酸类,,反义；,端粒酶逆转录酶 Effectofantisenseoligonucleotidesencodingtelomerasereversetranscriptaseonthyroidcarcinomacellapoptosis 【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofantisenseoligonucleotides(ASODN)encodingtelomerasereversetranscr
2、iptase(TERT)mRNAonthyroidcarcinoma(TC)cellapoptosis.METHODS:TheASODNandsenseoligonucleotides(SODN)encodingTERTRNAonTCcellapoptosisissionelectronmicroscope,Hoechest33258stainingandfloetry.RESULTS:TransmissionelectronmicroscopeshoanifestationsofTCcells;Hoechest33258stainingshoberofa
3、poptoticcellsfrom52±16to178±32;floetryrevealedthattheapoptosisratesofTCcellstreatedby5μmol/LASODN,SODN,ornothingentarytoTERTmRNAatsomeconcentrationcansequencespecificallyenhanceTCcellapoptosis. 【Keys;oligonucleotides,antisense; telomerasereversetranscriptase 【摘要】目的：探讨端粒酶逆转录酶(TER
4、T)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响.方法：体外培养TC细胞，TERTASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜，Hoechest荧光染色，流式细胞仪等方法分析ASODNTERT对TC细胞凋亡的影响.结果：透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态，Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32，流式细胞仪证实5μmol/LASODN处理组,SODN处理组及空白对照组的细胞凋亡率分别为10.4%,1.6%和无凋亡（P<0.05）.结论：
5、TERTASODN能增强TC细胞凋亡. 【关键词】甲状腺肿瘤；寡核苷酸类，反义；端粒酶逆转录酶 0 引言 端粒酶逆转录酶（telomerase reversetranscriptase,TERT）作为端粒酶蛋白主要组分，被称为端粒酶活性作用的限速因子［1］.端粒酶通常在除永生细胞系外的正常组织无活性表达，而TERT则可在正常组织中表达［2］.研究表明，甲状腺肿瘤作为最常见的内分泌肿瘤，其组织端粒酶阳性表达率20％～100％，与癌细胞分化程度有关，分化程度较好的乳头状癌阳性率相对较低(20％～67％)［3-7］，分化较差的滤泡状癌(67％～100％)与
6、未分化癌(67％～100％)比较则较高［5］.鉴于TERT在甲状腺癌(thyroidcarcinoma,TC)中的重要作用,我们采用反义核酸治疗技术,通过封闭TERT基因表达而抑制TC细胞增殖,旨在为防治TC探索基因治疗的新途径. 1 材料和方法 1.1材料 手术选取人TC组织,立置pH7.4的Hanks液中彻底清洗，并剪成1mm3左右小块，继续清洗至悬浮液澄清，500r/min离心5min，弃上清.将处理后的甲状腺组织块置三角烧杯中，加入10倍体积的0.5nkat/L的胶原酶，置50mL/LCO2孵箱中37℃消化2～3h，用200目不锈钢纱网过滤于
7、离心管中，500r/min离心5min，沉淀即为TC细胞.加入含200mL/L新生牛血清的改良Eagle培养液(DubleccosmodifiedEaglemedium,DMEM),吹打制成细胞悬液;最后以细胞密度5×107/L接种于培养瓶中,置37℃,饱和湿度,50mL/LCO2的培养箱中培养和传代.采用与以TERTmRNA翻译启始密码子为起点的一段序列，与该序列互补的为反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotides,ASODN)，与该序列相同的为正义寡核苷酸(senseoligonucleotides,SODN).ASODN序列为:5
8、′GAGCGCGGGTCATTGTGCT3′;SODN序列为:5′
