桂林地区2262例女性生殖道hpv感染及基因型结果分析

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1、桂林地区2262例女性生殖道HPV感染及基因型结果分析龚飞凤周云线桂林市妇女儿童医院，广西桂林　541001[摘要]目的了解桂林地区高危型人乳头状瘤病毒（HPV）感染及亚型分布情况，为预防子宫颈癌前病变、子宫颈癌提供参考依据。方法采用医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术对2262例妇女进行HPV-DNA基因结果分析。结果2262例妇女中检测出HPV阳性率26.22％，其中高危型感染率较高（19.20％），低危型感染率较低（7.02％）；普通女性中的感染率为18.89％，在宫颈病变患者中的感染率为84.

2、38％，两者相比差异有统计学意义（c2=457.01，P=0.00<0.05）；不同年龄段HPV阳性检出率不同，呈双峰U形曲线，第l峰位于年轻妇女（20~30岁），阳性率为24.61％，第2峰位于中老年妇女（51~65岁），阳性率最高51.74％；高危型主要以HPV52、16、58为主。低危型以HPV6、11最为常见。结论桂林地区2262例女性宫颈HPV感染常见高危型亚型是HPV52、16、58。低危型亚型是HPV6、11。感染年龄趋于年轻化和老年化。桂林地区的HPV感染基因分型符合亚洲人群分布

3、规侓，但有其地区特点。[.jyqkanpapillomavirus，HPV）是造成宫颈上皮内瘤变（CervicalIntraepithelialNeoplasia，CIN）以及宫颈癌的重要原因[1]。目前已经有200余种HPV得到了鉴定，其中有30多种亚型会导致宫颈病变[2]。感染不同亚型HPV由于分布的地域性差异，所产生的致癌性和后果也不同[3]。经过世界范围内的研究，由于种族和地理人群的差异，获得的HPV流行状况、感染峰龄和病毒类型也不尽相同[4-5]。该研究通过医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技

4、术，对2012年7月—2014年11月间该区感染HPV妇女宫颈和基因亚型的分布进行探析，基本对该地区妇女宫颈感染HPV情况有所了解，为该地区防治妇女宫颈癌、研发疫苗和使用提供依据。现报道如下。1资料与方法1.1一般资料该研究对桂林市妇女儿童医院妇科门诊就诊及体检共计2262例妇女进行HPV检测。行宫颈液基薄层细胞学（ThinprepCytologyTest，TCT）检测对检测结果阳性者。若HPV结果阳性合并TCT检查异常者要进行阴道镜检查同时在病变处取活检，通过病理检查确诊。患者均来自桂林地区，年龄2

5、0~65岁，平均年龄41.20岁。1.2仪器与试剂HybriMax核酸分子医用快速杂交仪；多聚酶链反应（PCR）仪（KP-CT48）；试剂有21种HPV-DNA提取试剂盒、HPV核酸扩增分型检测试剂盒以及PCR+膜杂交法试剂盒。共有21种HPV亚型检测，包括13种高危亚型（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59和68型），5种低危亚型（6，42，11，43和44型）以及3种中国人群常见亚型（53，66和CP8304型）。1.3方法1.3.1病理采集和储藏标本采集要在非月

6、经期进行，先将宫颈口处多余的分泌物用棉拭子清除，使用专用宫颈刷在宫颈内大约2cm处旋转5圈，然后把宫颈刷头放入有细胞保存液的样本的瓶中储存；放入4℃的冰箱中，3d内进行检测。1.3.2提取样本DNA和扩增PCR充分漂洗宫颈刷头，离心洗脱液（14000r/min离心5min），去除上清液只留管底细胞，然后加入400μL裂解液根据试剂盒说明书进行提取，把抽的DNA样本作为模板实施PCR扩增。扩增程序如下:95℃预热9min，95℃20s解链，55℃30s退火，72℃30s延伸，循环此过程40次。72℃延伸

7、5min，4℃低温保存。1.3.3导流杂交预热杂交仪和杂交液，将标记有21种HPV基因型寡核酸探针的低密度基因芯片放在杂交平台上，将加热冰浴后的PCR扩增产物添加到检测孔里实施导流杂交；将膜用封阻液封闭，将封阻液后清除后添加AP酶，30℃温育5min。AP酶催化底物中颜色物的生成，从而显示杂交结果，最后排液清洗。1.3.4读取结果膜条上共有21个位点和两个监控点。两个监控点分别监测扩增过程的有效性和杂交过程的有效性，其余21个位点分别对应试剂盒上21个常见HPV病毒类型。阳性为清晰可见的蓝紫色圆点，多

8、个圆点阳性即为多重感染。1.4统计方法用PEMS3.1统计软件，对两个样本率行c2检验，差异有统计学意义（P<0.05）。2结果2.1HPV总感染率及不同人群感染率及基因型别分布2262例妇女中检测出HPV感染者593例，阳性率为26.22％。其中有21种HPV亚型在这593名感染者中被检测出，这当中高危型HPV感染率较高（19.20％），低危型感染率较低（7.02％）。普通女性感染率为18.89％（385/2038），在宫颈病变患者中感染率为84