2 735例女性下生殖道hpv感染检测结果分析

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1、2735例女性下生殖道HPV感染检测结果分析作者：童郁，邵展，许锴，张德亭【摘要】　　目的：了解女性下生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别分布及特点。方法：采用核酸分子快速杂交分型技术对2008年1-12月间在温州医学院温州市第三临床学院妇产科就诊的2735例女性进行生殖道21种HPV检测并分型。结果：HPV总感染率为38.7%（1059/2735），21种HPV亚型（除HPV43型外）均有检出，其中单一型感染率为22.8%(623/2735)，混合型感染率为15.9%(436/2735)；HPV高危型感染率为31.3%(857/2735)，HPV低危型感染率为8.9%(244/2735)

2、。在1059例HPVDNA阳性感染者中检出率较高的HPV高危型有HPV16型（占17.7%），HPV52型（占12.2%），HPV58型（占13.5%）；低危型有HPV6型（占8.8%），HPV11型（占9.4%）。2735例HPV感染高峰年龄在30～40岁（占11.7%），50～60岁年龄段下降至4%，各年龄段HPV感染检出率差异有显著性（P<0.01）。结论：在温州地区，30～40岁为HPV感染的高峰年龄，高危人群HPV感染率达38.7%，HPV感染的常见型别为HPV16，HPV52，HPV58，HPV6和HPV11。【关键词】人乳头瘤病毒基因分型DNA杂交8　　人乳头瘤病毒(HP

3、V)是一种小的DNA双链病毒，可以特异性地感染人皮肤和黏膜的鳞状上皮细胞，引起多种良、恶性病变。在HPV感染导致的疾病中，最常见的就是尖锐湿疣和宫颈癌。根据感染的致癌性与否又可分为高危亚型和低危亚型。HPV的致病性与其亚型有关，如低危亚型感染仅诱发生殖器疣样病变，高危亚型感染是导致宫颈癌发生最主要的原因。为了解本地区女性HPV的感染情况和型别分布，我们对2008年1-12月来我院就诊的2735例的女性下生殖道标本进行了HPV基因分型检测，报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1一般资料：病例来源于本院妇产科门诊就诊、自愿接受生殖道HPV感染筛查的有性生活妇女，选取2735例有宫

4、颈炎症或宫颈糜烂等临床指征的病例做HPV检测。年龄16～70岁，平均年龄(35.6±10.6)岁。从年龄≤20岁开始，以10岁为一年龄段，到≥60岁，分为6个年龄组。　　1.1.2标本采集及保存方法：用窥阴器暴露宫颈，拭去宫颈口黏液，将宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针方向旋转5周。慢慢取出宫颈刷。将其放入标有患者编号的取样管内，取样管中已加有专用细胞保存液，拧紧瓶盖。标本在室温保存放置不超过2h，4℃8保存不超过24h，-20℃保存不超过3个月。样本应避免反复冻融。　　1.1.3试剂及仪器：HPV分型基因芯片检测系统；HbriMax医用核酸分子快速杂交仪和HPV扩增分型检测试剂盒(

5、凯普生物化学有限公司，上海)；PE5700基因扩增仪(PE公司，美国)；DNA提取试剂盒(达安公司)。　　1.2方法　　1.2.1样本处理：将装有样本的微量离心管，以14000r/min速度离心5min，弃上清，保留管底沉淀物，加入50μL裂解液悬浮沉淀，100℃加热10min，以14000r/min速度离心10min，取上清液按DNA提取试剂盒步骤操作。　　1.2.2PCR扩增：取PCR反应管1支，在管壁上做好标记，分别加入已提取的待测样品DNA1μL，反应总体系25μL，每次实验必须设置一个阴性对照及阳性对照，处理方法同标本。PCR反应条件为20℃10min，95℃9min，尔后循环40

6、次(95℃，20s；55℃，30s；72℃，30s)；72℃延伸5min。　　1.2.3杂交及显色：将PCR产物20μL在95℃加热5min，然后冰水浴至少2min；让杂交仪预热45℃8，在杂交孔内放好膜芯片，用1mL杂交液预处理分子膜；将产物20μL加入杂交液(45℃)混匀。加在分子膜上温育10min，排泵，杂交液冲洗膜3次，设定温度25℃，用0.5mL的封阻液封闭5min，排泵，加入0.5mL酶标液，温育4min；设置温度36℃，用溶液a洗膜4次，加入0.5mLNBT/BCIP显色液3min，用溶液b洗膜4次，观察结果。当对照膜条PC点出现BIOTIN点和IC点蓝色斑点时提示PCR、杂交

7、、显色等各个环节操作正常，此时结果真实有效。　　2结果　　2.1HPV感染的型别分布　　在2735例样本中检出HPVDNA阳性病例1059例，阳性检出率为38.7%，检出高危基因型(HPV16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/68型)857例，阳性率为31.3%；检出低危型(HPV6/11/42/43/44型)244例，阳性率为8.9%；检出常见亚性（HPV53/66/cp804）