革兰氏染色实验报告.pdf

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1、细菌革兰氏染色实验报告作者：刘冲地址：山东大学摘要：本次实验是通过一种特殊的染色方法-----革兰氏染色法进行细菌鉴定。细菌一般可分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，本实验将通过革兰氏染色使细菌呈现不同的颜色以达到鉴别菌种的目的。革兰氏阴性菌将呈现红色，革兰氏阳性菌将呈现紫红色。要想达到此目的，要求革兰氏染色必须成功。因此，在实验中要特别注意革兰氏染色的注意事项和影响实验成功的关键因素。除了掌握革兰氏染色法外，我还掌握了油镜的使用。实验得到了应有的结果，通过其颜色不同鉴别了实验菌种的革兰氏阴阳性。关键词：革兰氏染色细菌鉴定

2、颜色油镜前言：本实验的目的主要是通过动手操作使我们学习并掌握革兰氏染色法，了解革兰氏染色的原理，巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。革兰氏染色法可把细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异所决定的。（细胞壁的组成结构比较可看下图）革兰氏染色有很大的意义，主要如下鉴别细菌、选择药物、细菌致病性（革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的致病作用不同）。因此，革兰氏染色法有着广阔的应用前景。在若干疾病中中，有很多都是由细菌引起的。在生活中，细菌无处不在，不会由单一的菌种存

3、在（除了特殊培养以外）。因此，在探明病人病因时+-了解致病菌种是非常重要的。革兰氏染色可以将病菌分为GG两种类型，我们可以通过这种方法对菌种加以鉴别，在医学上加以应用。利用革兰氏阴阳性可以了解细菌的致病性情况，应用于医学造福人类。1材料与方法1.1材料1.1.1菌种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌1.1.2试剂试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95％乙醇、番红复染液、水仪器：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、接种环、试管架、镊子、载玻片夹子、滤纸、滴管1.2方法操作步骤示意图：

4、干燥、固定水制片初染媒染媒染水晾干水脱色复染镜检步骤（一）制片。分别取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌按常规方法依次进行涂片（不宜过厚）、干燥（可以用酒精灯烘干）和固定。步骤（二）初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1-2min后倾去染液，水洗至流出水无色。步骤（三）媒染。先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无色。步骤（四）脱色。将玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般20-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。步骤（五）复染。将玻片上

5、残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min,水洗，吸去残水晾干。步骤（六）镜检。向涂片涂菌部位滴加适量香柏油，进行油镜观察。2结果与分析2.1结果图1大肠杆菌图2枯草芽孢杆菌如图是油镜下细菌涂片的照片。可以看出，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌呈紫红色，属革兰氏阳性菌；大肠杆菌呈红色，属革兰氏阴性菌。如下表：图3金黄色葡萄球菌表1实验结果分析菌名菌体颜色细菌形态结果-大肠杆菌红色椭圆状G+金黄色葡萄球菌紫红色圆形，团聚G+枯草芽孢杆菌紫红色杆状G2.2分析可以看出，枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌呈紫红色，属革兰氏阳性菌；大

6、肠杆菌呈红色，属革兰氏阴性菌。通过其在油镜下显色不同，即其革兰氏阴阳性不同区分不同菌种。2小结该小结共包括两部分。1、实验内容：①通过本次实验，掌握了革兰氏染色的具体操作过程，锻炼了自己的动手操作能力，学会了通过革兰氏染色辨别细菌菌种。②实验成功关键之一：选用活跃生长期长的菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。③实验成功关键之二：涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。④实验成功关键之三：脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。⑤关于油镜的使用，已知香柏油的折射率是1.

7、52，玻璃的折射率是1.55，两者的折射率相近，因此用香柏油做油镜实验。⑥了解革兰氏染色法原理：G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。2、实验过程：①实验开始前，认真观察了老师示范，并做了相关记录。②实验过程中应注意，加热时使用载玻片夹及试管夹，以免烫伤。③使用染液时应避免沾在衣物上。④使用乙醇时

8、勿靠近火焰。⑤实验后要洗手。⑥实验结束以后，要自觉把油镜擦干净，不易擦除的污点可以涂适量二甲苯然后擦除。3参考文献沈萍，陈向东.微生物学实验[M].4版.北京；高等教育出版社，2007