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时间:2018-12-29
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1、为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划细菌的简单染色与革兰氏染色实验报告(共4篇) 细菌的简单染色和革兰氏染色实验 实验目的 1.学习微生物涂片,染色的基本技术,掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。、 2.巩固显微镜的使用方法。 基本原理 1.简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。此法操作简单,适用于一般形态的观察。 在中性,碱性或酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易于带负电荷的
2、细菌结合而是细菌着色。带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。通常的碱性染料除了美蓝外,还有结晶紫,碱性复红,番红等。细菌体积较小,较透明,如未经染色常不易识别,而经染色后与背景形成鲜明的对比,是易于在显微镜下观察。 2.革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌 上最常用的鉴别染色法。该染色法所以将细菌分为G+和G-菌,是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展,
3、保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄,交联度低,故用乙醇脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透,结果细菌被脱色,在经复红染色后就成了红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时颜色。 革兰氏染色需要四种不同的溶液,碱性染料初染液,煤染剂,脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于
4、革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力,即已某种方式帮助染料固定在细胞上,是不易脱落,碘是常用的媒染剂。脱色剂是被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精。复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染剂,复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色,从而将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的染色液是复红。 器材 1.活材料,培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。 2.染色液和试剂,碱性美兰,结晶紫,碘页,95%酒精,石炭酸复红,蒸馏水,乙醚-乙醇目的-通过该培
5、训员工可对保安行业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 混合液,香柏油。 3.器材,废液缸,洗瓶,载玻片,接种杯,酒精灯,擦镜纸和显微镜。 操作步骤 1.涂片,取干净的载玻片与实验台上,在正面边角作记号,并滴一滴无菌蒸馏水与载玻片 中央,灼烧接种杯,待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混均后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2.干燥,干燥过程最好在空气中自然晒
6、干,为了加速干燥,也可以在微小火焰上方烘干。 烘干后再在火焰上方快速通过3-4次,使菌体完全固定在载玻片上。但不宜在高温下长时间烤干,否则急速失水会使菌体变形。 3.染色,滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,染色液量以盖满菌膜为宜。 4.水洗,倾去染液,斜置载玻片,用水冲去多余染液,直至流出的水呈无色为止。 5.干燥,用微热烘干或自然晾干。 6.镜检,按显微镜的操作步骤观察细菌形态,及时记录,并进行形态图绘制。 革兰氏染色目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解,并感受到安保行业的发展的巨大潜力,可提升其的专业水平,并确保其在这个行业的安全感。为
7、了适应公司新战略的发展,保障停车场安保新项目的正常、顺利开展,特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划 各种细菌经革兰氏染色法染色后,能区分成两大类,一类最终染色成紫色,称为革兰 氏阳性细菌G+,另一类被染成红色,称革兰氏阴性细菌G-。 操作步骤 1.涂片,固定。同简单染色法。 2.初染 滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,水洗。 3.媒染 滴加革兰氏碘液,染1-2min,水洗。 4.脱色 滴加体积分数为95%的乙醇,约45S后水洗;或滴加体积分数为95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇,如此重复2-3次后即水洗。 5.复染 滴
8、加沙皇液(番红),染2-3min,水洗并使之干燥。
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