重楼多糖的化学修饰及体外活性研究

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1、分类号：Ｑ９４６．３单位代码：１０７２０１５０７１００１０１密级：公开学号：ＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ硕士学位论文重楼多糖的化学修饰及体外活性研究ＣｈｅｍｉｃａｌＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＰａｒｉｓｏｌｈｌｌａｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｐｙｐｙＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｖｉｔｒｏ论文作者：蔡艳妮指导教师、职称：杨培君教授学科、专业名称：理学植物学研究方向：植物天然产物研究二〇一八年六月分

2、类号：Q946.3单位代码：10720密级：公开学号：1507100101硕士学位论文重楼多糖的化学修饰及体外活性研究ChemicalModificationandActivityofParispolyphyllavar.chinensisPolysaccharideinvitro论文作者：蔡艳妮指导教师、职称：杨培君教授学科、专业名称：理学植物学研究方向：植物天然产物研究二○一八年六月摘要植物多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抑菌和免疫调节等生理作用，适当的化学修饰可增强或增加其生理活性。重楼(ParidisRhizom

3、a)因广泛的药理作用和显著的临床疗效而倍受关注。目前，重楼皂苷类成分的结构解析、分离鉴定及药理作用等方面的研究成为热点之一，有关重楼多糖的研究较少，其化学修饰尚未见报道。本实验研究，以秦巴山区优势中药材七叶一枝花ParispolyphyllaSmithvar.chinensis(Franch.)Hara的干燥根茎为供试材料，制备重楼多糖(PPCP)，采用苯酚–硫酸法对PPCP进行含量检测，同时对检测方法进行了优化及验证；重点开展了PPCP的乙酰化修饰和硫酸化修饰，在优化工艺下制备了乙酰化重楼多糖(A-PPCP)、硫酸化重

4、楼多糖(S-PPCP)，进而就PPCP，A-PPCP和S-PPCP体外抗氧化及清除NO-的活性，进行了对比研究。主要研究内容及结果如下。2（1）采用热水浸提法提取，经除蛋白、醇沉、透析分离纯化，制备PPCP；通过苯酚–硫酸法对PPCP进行含量测定，并建立了苯酚–硫酸法检测PPCP的优化条件：浓硫酸用量6.5mL，苯酚用量2.0mL，显色温度30℃，显色时间30min，样品考察量为0.2mg。在上述条件下，PPCP的平均含量为91.3%，方法的平均回收率为97.8%，RSD为1.2%，检测结果准确性、稳定性高，检测方法可行

5、。（2）着重开展了PPCP的乙酰化修饰和硫酸化修饰，并对相应修饰工艺进行了优化。以0.25gPPCP为原料，通过响应面法优化重楼多糖乙酰化修饰的最佳工艺为：配料比7∶1(g∶g)，反应温度25℃，反应时间30min，在此工艺下，A-PPCP的乙酰基取代度均值为0.342。采用正交试验优化重楼多糖硫酸化修饰工艺，最佳条件为：浓硫酸与正丁醇配比3∶1(V∶V)，反应温度0℃，反应时间1.0h，该工艺下制备的S-PPCP取代度约为0.402。（3）通过紫外分光光度计和红外光谱仪，对优化工艺下制备的2种化学修饰多糖进行了光谱鉴定

6、。以PPCP的光谱图为对照，根据A-PPCP，S-PPCP的紫外光谱吸收峰和红外光谱特征峰，结合相应取代度的测定结果，表明PPCPi的乙酰化修饰和硫酸化修饰均取得成功。-•和NO-（4）通过体外清除DPPH•，•OH，O22活性测定，考察了PPCP，A-PPCP，S-PPCP的体外抗氧化活性及清除NO-活性。通过数据分析，与PPCP2相比，A-PPCP，S-PPCP清除DPPH•活性的IC50值分别降低了34.62%和36.99%，清除•OH活性的IC50值分别降低了28.07%和23.00%，表明乙酰化修饰和硫酸化-•

7、，NO-修饰均可有效提高PPCP体外清除DPPH•，•OH活性。A-PPCP清除O22活性的IC50值较PPCP分别降低了9.32%、21.27%，表明乙酰化修饰可不同程度的-•，NO---增强PPCP清除O22的活性。相反，S-PPCP清除O2•，NO2活性的IC50值较PPCP分别增大了13.79%，8.62%，表明硫酸化作用可引起PPCP的O-2•，NO-清除活性的减弱。2本研究，首次开展了重楼多糖的乙酰化和硫酸化修饰，并对其相应的修饰工艺进行了优化；进而开展了PPCP，A-PPCP和S-PPCP的体外抗氧化作用和

8、清除NO-作用的对比研究。此外，优化了苯酚–硫酸法检测重楼多糖的条件，所建方2法准确性高、重现性好，可用于重楼多糖的检测。其研究结果，为重楼多糖的深入研究与开发利用，提供参考资料和科学依据。关键词：重楼；多糖；化学修饰；体外活性iiAbstractPlantpolysaccharidesappeartoextensi