水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病hl┐60细胞的影响

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1、水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL┐60细胞的影响摘要:目的研究水杨酸钠对HL-60细胞的影响.方法用MTT法检测水杨酸钠对HL-60细胞存活率的影响;光镜、电镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析DNA含量;An-nexin-V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化.结果水杨酸钠明显抑制HL-60细胞生长，并呈时间、剂量依赖性;5mmolL-1（IC50）的水杨酸钠作用后，HL-60细胞出现典型的凋亡形态特征，并检测到亚二倍体峰;同时，靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组（0.24vs0.03）.结论水杨酸钠能抑制HL-60细胞生长并促进其凋亡.　　Keysalicyl

2、ate;HL-60cells;apoptosis　　Abstract:AIMTostudythegrosalicylate（Na-Sal）onHL-60cells.METHODSTheviabilityofHL-60cellsea-suredbyMTTassay;themorphologicalchangesicroscope;DNAcontentetry;andthephosphatidylserine（PS）exposuree-dependentmanner.HL-60cellstreatedbyNa-SalmolL-1（IC50）orphology，arkedly

3、increasedintehNa-Salgroup（0.24）vsthecontrol（0.03）.CONCLUSIONNa-Salismostpo-tentininhibitinggrosalycilate，Na-Sal）对某些髓系白血病细胞株具有较强的促凋亡活性［2］.为了深化对Na-Sal这一新药理作用的理解，我们采用HL-60细胞为对象，进一步探讨了Na-Sal对人早幼粒细胞白血病细胞生长与凋亡的影响.　　1材料和方法　　1.1材料Na-Sal，噻唑蓝（MTT）分别为Acros及Sigma公司产品，AnnexinVFITCKit购自美国Im-munotech公司

4、，该试剂盒由异硫氰酸荧光素（FITC）标记的AnnexinV，碘化丙啶（Propidium，PI）等组成，2～8℃避光保存.其他常用试剂为国产分析纯.人早幼粒细胞白血病HL-60细胞株由本校病理学教研室惠赠，悬浮培养于含100mLL-1胎牛血清（杭州四季青）的RPMI1640（Gibco）培养液（含1×105UL-1青霉素和100mgL-1链霉素）中，37℃，50mLL-1CO2条件下培养传代，实验用对数生长期细胞.　　1.2方法　　1.2.1细胞毒试验HL-60细胞悬液100μL（1×104）接种于96孔板，孵育过夜，次日加入含不同浓度Na-Sal的RPMI16401

5、00μL，使Na-Sal终浓度分别为0.5，1，3，5，7mmolL-1，每组3个平行孔;孵育24h后各孔加MTT（5gL-1）20μL，继续孵育4h，离心弃上清，加入150μLDMSO，平板振荡仪振荡10min，在酶联免疫检测仪测定A570nm值，计算细胞存活率（处理组A570nm/对照组A570nm）.实验重复3次.绘制剂量效应曲线，并求出HL-60细胞对Na-Sal的IC50值，以此浓度的Na-Sal，再按上方法分别测定孵育12，24，36，48h时间点的细胞存活率，并绘制时间效应曲线.　　1.2.2透射电镜观察HL-60细胞与5mmolL-1Na-Sal孵育16

6、h后，于倒置显微镜下观察悬浮状态下细胞的形态改变.然后将该细胞（1×106L-1～1×107L-1）离心5min（800rmin-1），弃上清，沿管壁缓慢加入40mLL-1戊二醛，4℃固定24h，常规电镜脱水、包埋，双铅染色，超薄切片，透射电镜（JEM-2000EX日本）观测靶细胞超微结构特征.　　1.2.3流式细胞仪术［3］HL-60细胞和5mmolL-1Na-Sal共孵育10h后取1×106细胞，离心5min（1000rmin-1），PBS洗2次，700mLL-1冷乙醇4℃固定24h，与含10mLL-1RNase的Tris-HCl缓冲液（pH7.4）孵育30min，

7、PI染色30min，流式细胞仪（ProfileⅡCoulterUSA）检测DNA含量.AnnexinV结合分析按试剂盒说明书进行操作.流式细胞仪检测荧光强度.　　图1略　　2.2Na┐Sal对HL┐60细胞形态的影响5mmolL-1Na-Sal处理16h后多数HL-60细胞解离成彼此粘附成簇、且呈台盼蓝拒染的圆形小体.透射电镜下可见细胞固缩，染色质浓缩、边集至核膜下.　　图2略　　2.3Na┐Sal诱导HL┐60细胞形成亚二倍体峰HL-60细胞与5mmolL-1Na-Sal共同孵育10h后，流式细胞仪检测出现DNA含量为亚二倍体的细胞群，