长叶胡颓子叶对小鼠免疫功能的影响

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时间:2018-11-07

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1、长叶胡颓子叶对小鼠免疫功能的影响  InfluenceofLeavesofElaeagnusbockiiDielsonImmunefunctionsofMice  Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofleavesofElaeagnusbockiiDielsonimmunefunctionsofmice.MethodsAftermiceountofphocytesreplicationusandspleen,promotedphagocyticfunctionofphagocytesofmice,en

2、hancedreplicationofTlymphocytes.ConclusionLeavesofElaeagnusbockiiDielscanobviouslyincreaseimmunefunctionsofmice.  Keymunefunctions  胡颓子科Elaeagnaceae植物,全球共有3属约80余种,我国有沙棘属Hippophae和胡颓子属Elaeagnus两属。沙棘属我国只有4种[1],已经得到较好研究、开发和利用,并取得了巨大的经济、生态及社会效益[2]。胡颓子属我国约有51种[1],全国各地均产,但长江流

3、域及以南地区更普遍,资源极为丰富,但其药用、食用等作用至今研究较少。本课题组选用生长于湖北省巴东县的长叶胡颓子ElaeagnusbockiiDiels研究其抗肿瘤作用。为探讨其抗肿瘤作用及机理,我们做了长叶胡颓子叶对小鼠免疫功能影响的实验研究。  1材料  1.1动物昆明种小鼠、雌雄各半,体重18~22g。  1.2主要试剂长叶胡颓子叶采自湖北省巴东县,四噻唑盐(MTT),Sigma公司产品。BRMI1640细胞培养基,GIBCO公司产品。植物血凝素(PHA),Sigma公司产品。二甲基亚砜(DMSO),苏州化工研究所产品。MK3型酶

4、标仪,芬兰雷勃中国总部产品。  2方法  2.1受试物及给药长叶胡颓子叶常规水煎2次,用纱布过滤后混合并浓缩至1g生药/ml,4℃保存备用。实验小鼠随机分成4组,每组10只,正常对照组用生理盐水灌胃0.4ml/d,共10d;实验1,2,3组分别用胡颓子叶水煎液10,20,30g/kg・d-1灌胃,连续10d后测定以下指标。  2.2巨噬细胞吞噬功能测定实验第10天各组小鼠称体重,然后每只小鼠腹腔注射5%淀粉肉汤1ml,致敏24h后,腹腔注射1ml,5%鸡红细胞悬液,4h后脱臼处死小鼠,并在腹腔注入5ml冷Hank液,按摩

5、腹部5min后,解剖小鼠,无菌吸取腹腔液涂片,晾干,甲醇固定5min,瑞姬氏复合染色剂染色,镜检,在油镜下观察,随机计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞及吞噬的鸡红细胞总数,并计算巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数。  2.3免疫器官脏体比的影响上述处死小鼠,无菌操作取胸腺,脾脏称重,分别计算胸腺指数、脾指数。  2.4T细胞增殖反应测定(MTT法)[3]无菌取脾脏制备小鼠脾细胞悬液,用RPMI1640I不完全营养液流涤3次,10000r/min离心,然后用完全营养液配成3.5×106ml,台盼蓝染色检测细胞存活率>95%;取100ml加入9

6、6孔细胞培养内(每孔含3.5×105ml个细胞,每个样品做3个复孔),加入240mg/L的PHA20ml(使终浓度为40mg/L,同时设不加PHA对照孔),置37℃、5%CO2培养箱中培养48h后,每孔加入MTT10ml(5g/L),再继续培养4h,离心,弃上清,加入30%DMSO100ml充分振荡后静置20min,最后用酶标仪于波长570nm处测OD值。结果以3个复孔的平均值±标准差表示。  3结果  3.1长叶胡颓子叶对小鼠免疫器官脏体比的影响结果见表1。  表1长叶胡颓子叶对小鼠胸腺和脾脏的影响(略)  与对照组比较,aP<0.

7、05  3.2长叶胡颓子叶对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响结果见表2。  表2长叶胡颓子叶对小鼠巨噬细胞活性的影响(略)  与对照组比较,bP<0.01  3.3长叶胡颓子叶对小鼠T淋细胞巴增殖的影响结果见表3。  表3长叶胡颓子叶对小鼠T细胞增殖的影响(略)  与对照组比较,bP<0.01  4讨论  本实验结果显示,长叶胡颓子叶能增加小鼠胸腺指数和脾指数,增强腹腔吞噬细胞的吞噬功能,促进T淋巴细胞增殖,且胡颓子叶对小鼠免疫功能增强作用的程度与胡颓子叶浓度之间有一定的依存关系,在一定范围内随浓度增加而增强(实验2,3组比实验1组效果好)

8、,但到了一定剂量后其作用效果就不再继续上升(实验2,3组之间差异无统计学意义P>0.05)。巨噬细胞是机体内生物学作用最为活跃的细胞,具有吞噬、杀伤及消化病原体、杀伤肿瘤细胞,并在特异性免疫应答中参与抗原的提呈及免疫调节

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