细胞骨架蛋白destrin在创伤性动脉瘤血管壁组

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1、细胞骨架蛋白destrin在创伤性动脉瘤血管壁组【摘要】研究细胞骨架蛋白中destrin蛋白在创伤性动脉瘤血管壁组织中的表达情况及其与创伤性动脉瘤临床表现及病理特征等的关系，分析其在血管壁组织修复过程中的可能作用。［方法］采用aticarterialaneurysm(TAA)vesseloralarterialtissuesof8normalsubjects.Thedifferenceofproteinexpressionoralarteryofnormalsubjects(P＜0.05).Theproteinexpressionofdestrinokingbutnotcorrelated

2、eterssuchasage,diameterofartery,hypertension,andintraoperativethrombusdegree.［Conclusion］TheexpressionofproteindestrininTAAtissueislooralarteryofnormalsubjects.Theproteinexpressioniscorrelatedoking.ThestudymaybehelpfulforthefurtherinvestigationofthemolecularmechanismsinvolvedinTAA.Keyaticarteriala

3、neurysm；trauma；expression；gene；protein；destrin创伤性动脉瘤(traumaticarterialaneurysm，TAA)是继发于各种局部创伤如骨折伤、穿刺伤、手术伤等引起的动脉管壁破裂、出血所诱发的假性动脉瘤，可发生于全身各处动脉，以四肢主干动脉居多，是外科常见疾病。目前认为，创伤性动脉瘤的发生与转归是动脉管壁损伤因素和动脉本身血流动力学因素共同作用的结果。因该病具有不稳定性，可引起各种严重并发症等临床特点，所以对这类损伤的早期正确诊断，手术及时修复损伤血管，促进管壁重建是减少并发症、保全肢体功能的关键［1］。虽然近年在TAA临床外科治疗中取得

4、了一定经验，但是对损伤管壁组织重构的基础研究依然处于初步阶段，阻碍了对该病的进一步认识。因此，着眼于受损动脉管壁微环境重构的研究对该病的诊疗及预后均有重要意义。本研究所在前期研究中证实，动脉中膜平滑肌细胞骨架的肌动蛋白纤维重构是动脉为适应损伤后血流动力学及机械应力变化而发生的早期改变之一［2］。本研究在前期发现基础上，采用in内采集，预冷生理盐水冲洗清除血管壁上的血液和附壁血栓后迅速冻存于-80℃冰箱中，以便下一步提取蛋白和mRNA。以上所有标本均经病理诊断证实，具备完整的病历资料。实验分组即分为TAA标本组（13例）和正常标本组（8例）。1.2主要实验试剂与器材Trizol试剂（美国In

5、vitrogen公司），MMLV逆转录酶、Taq酶等，荧光定量PCR仪及分析软件（BIORAD公司），PCR引物与探针由上海生工生物技术有限公司合成，一步法试剂盒购自美国Invitrogen公司。一抗羊抗人多克隆抗体destrin、内参β-actin购自美国SantaCruz公司，酶标二抗购自美国Sigma公司，内参二抗购自美国SantaCruz公司，免疫印迹电化学发光试剂盒（美国SantaCruz公司），DNAAnalysis2.0凝胶图像处理系统（美国Kodak公司），电泳系统及电转移装置（美国BIO-RAD公司）。1.3实验方法1.3.1实时荧光定量（RT-PCR）法检测mRNA表达

6、：取组织样品100mg应用Trizol法常规提取总RNA，微量核酸定量分析仪定量后取2μg总RNA，随机引物法逆转录合成cDNA。destrin引物与探针采用PRIMER5.0引物设计软件设计，采用GAPDH作为内参照。destrin引物（扩增产物为164bp）上游5’-ATACACAGGCACTACGAGAATGGAG-3’，下5’-CTTTTCTTGATTTCTTCTGGTGTGG-3’，探针5‘（FAM）-AAGGTCAGAGCCCTGGGCAGTGTTG-3’（TAMARA）；GAPDH上游5‘-GACAACTTTGGTATCGTGGAAGG-3’，下游5‘-CCAGTAGAGGC

7、AGGGATGATGT-3’，探针5‘（FAM）-CTCATGACCACAGTCCATGCCATCACT-3’（TAMARA）。采用一步法试剂盒进行RT-PCR实验，反应体系及反应条件严格按照说明书进行：反应总体积为30μl，反应条件为95℃预变性4min×60个循环。结果计算：CT值代表每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所进行的有效循环数，重复扩增3次取平均CT值。TAA标本组与正常标本组的比较以目的蛋白（dest