大鼠急性坏死性胰腺炎时p物质在肠壁上的表达及其与

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1、大鼠急性坏死性胰腺炎时P物质在肠壁上的表达及其与［摘要］目的:了解急性坏死性胰腺炎（ANP）时大鼠回肠组织中P物质的表达及其与肠黏膜通透性的关系。方法:健康成年SD大鼠随机分为对照组40只和ANP组40只，对照组开腹后只翻动胰腺，ANP组大鼠胰胆管恒速逆行注射5%牛黄胆酸钠制成ANP大鼠模型，分别于制模成功后8、12、16和20h处死大鼠采取标本。用同位素法测定肠黏膜通透性，免疫组织化学方法检测P物质在回肠组织中的表达水平和组织学定位。结果:ANP组大鼠回肠组织中P物质的表达以及肠黏膜通透性（99mTc-DT-PA排泄率）较对照组明显增加

2、（P<0.05）。P物质在回肠组织中的表达与肠黏膜通透性呈明显正相关（r=0.66，P<0.01）。结论:ANP时大鼠回肠组织中P物质表达升高，且随时间延长而增加，其表达与大鼠肠黏膜通透性呈正相关。　　［关键词］急性坏死性胰腺炎;神经激肽.1受体;P物质;肠黏膜通透性;大鼠　　急性坏死性胰腺炎（acutenecrotizingpancreatitis，ANP）起病急，病情凶险，当合并胰腺及胰周感染时，病情更加复杂，死亡率明显增加。临床上急性胰腺炎死亡的病人中80%是由胰腺坏死组织继发感染所致。肠源性因素在急性胰腺炎继发感染中的

3、作用和重要性已被认识并确立，因此，探讨ANP时肠黏膜通透性的发生机制对防治胰腺感染有重要意义。急性胰腺炎时，炎症介质的产生和释放以及炎症细胞的聚集在病程中起重要作用。目前明确的前炎症或促炎症细胞因子较多，其中P物质及其受体―――神经激肽.1受体（NK.1R）近年来受到高度重视［1］。但P物质在ANP回肠组织中的表达尚不清楚，P物质与肠黏膜通透性之间的关系也未阐明。本实验通过制作ANP大鼠模型，应用免疫组织化学法研究ANP时P物质在回肠中的表达和组织学定位，进而探讨P物质与肠黏膜通透性之间的关系。　　1材料和方法　　1.1实验动物及分组　　

4、健康成年SD大鼠80只，体重250～280g，雌雄各半，由东南大学医学院实验动物中心提供，随机分为对照组和ANP组各40只。　　1.2主要试剂及配制　　浓缩型兔抗大鼠P物质抗血清、即用型SABC试剂盒、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），血清淀粉酶（AMS）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），牛磺胆酸钠（Sigma公司），亚锡喷替酸（DT-PA）（中国原子能科学研究院同位素所），锝（99mTc）（中国核动力研究设计院第一研究所）。称取牛磺胆酸钠2g溶入40ml生理盐水（NS）中，制成5%牛磺胆酸钠溶液，在超净台内用过滤器（滤

5、孔为0.22nm）过滤溶液除菌，分装于2只无菌瓶中，常温避光保存备用。99mTc.DTPA制备:用灭菌NS淋洗钼.锝发生器获得99mTc淋洗液，放射活度仪测定其放射活度，灭菌NS将其稀释成放射活度为100μCi・ml-1，DTPA标记。　　1.3实验方法及步骤　　1.3.1模型制作　　实验前大鼠禁食12～16h，自由饮水。大鼠称重，3%戊巴比妥钠0.1ml・（100g）-1腹腔注射麻醉。妥善固定大鼠，切开腹壁进入腹腔。近肝门处用无损伤小动脉夹夹闭胆总管，于胆胰管入十二指肠处对侧缘，用连接微量注射泵的4.5号针头

6、斜行刺入十二指肠壁，并进入胰管0.3cm处，以恒定速度（0.1ml・min-1）注入5%牛磺胆酸钠［0.1ml・（100g）-1］。并于近端空肠内缓慢注入100μCi99mTc-DTPA。关腹后向大鼠背部皮下注入NS4～6ml。　　对照组仅将十二指肠提出切口，轻轻翻动胰腺3次，而不注射牛磺胆酸钠。　　1.3.2标本采取　　距原切口1.0cm切开腹壁，观察腹腔内大体病变情况。　　无菌抽取下腔静脉血2～3ml，放入离心管中以3000r・min-1离心10min，取上清行血清淀粉酶测定（碘.淀粉比色法）

7、。切取2cm长末段回肠，用10%甲醛固定，4℃保存，并收集大鼠8、12、16和20h尿液。　　1.3.3肠黏膜通透性的检测　　选用分子直径11nm的99mTc-DTPA为探针，测定尿液中同位素脉冲数，以间接反映肠黏膜通透性。99mTc.DTPA为水溶性，无毒，在体内不代谢，通过尿液测定，具有敏感、准确、简单的优点。计算公式:肠黏膜通透性（%）=99mTc.DTPA排泄率（%）=（尿液测定值-本底测定值）×总尿量药物测定值-本底测定值×100%。　　于近端空肠内缓慢注入100μCi99mTc.DTPA后放入代谢笼，留取大鼠8、12、16和2

8、0h尿液，用放射免疫γ计数器测定尿液中99mTc.DTPA脉冲数。1.3.4回肠组织P物质蛋白表达及组织学定位　　应用免疫组织化学法分别检测对照组和ANP组回肠组织的P物质表达水平。　　操作步