舒肝驱毒方对hsc活化增殖及其相关细胞因子作用的研究

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1、分巧号Ｒ２４学校代号１（＾２？ＵＰＣ６１０巧级学号２０１３２４５０５６１■种＠／【中虔為夫嗦ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ博±学位论文（港巧台、境外生）舒巧驱毒方对ＨＳＣ活化增殖及其￣相关细胞因子作用的研究学位申请人江育淸指导教师姓名王新华专业名称中医临床基础申请学位类型科学学位论文提交日期２０１６年４月■■■＇Ｖ．－．＂■－．？、．．＂－Ｉ，：’如：

2、＾—Ｖ＇苗；附：广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果。除文中己经特别加Ｗ注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名＾曰期：ＺＣ《年ｙ月作曰关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口机

3、构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）乃论文作者签名＾论文导师＾曰期：年月／方曰中文摘要肝纤维化是一切慢性肝病共同的病理学基础，是涉及多种细胞、细胞因子、细胞外基质巧ｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）及其降解酶类、细胞调亡等多个复杂因素的病理生理过程。各种因素之间相互影响、相互交错，形成肝纤维化的动态变化网

4、络，而肝星状细胞州巧ａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ，胎Ｃ）的激活是这个复杂网络的中也环节。巨ＣＭ成分合成和降解的失衡是导致肝组织重构、发生纤维化的直接原因，异常激活的ＨＳＣ是ＥＣＭ的主要来源，细胞因子及多肋类生长因子等调控因子是启动、调节ＨＳＣ生物学行为的重要因素，细胞调亡是机体自身平衡ＨＳＣ数量和功能的主要手段。肝星状细胞一（ＨＳＣ）是肝脏中的种非实质细胞，位于Ｄｉｓｓｅ间隙内，形态不规则，胞体呈卵圆形，胞质富含维生素Ａ脂滴，核周部分包埋在邻近肝细胞的隐窝内，其对肝脏的ＥＣＭ产生、生长因子合成、

5、基质重建Ｗ及窦孔改变等生理过程均可产生影响。研究发现，多种细胞、细胞因子、ＥＣＭ和非狀类介质（如乙醇、活性氧等）参与胎Ｃ的激活和肝纤维化。Ｗ往的中医药学记录了很多的单味中药和中药复方，能够间接或直接地保护肝脏一，治巧肝纤维化。作为治疗肝纤维化的筛选药物，自拟方舒肝驱毒方是个很好的选择，其中有许多原因：舒肝驱毒方中柴胡、山甲珠、丹参、赤巧、Ｈ古粉舒肝解郁，益气养阴，调理气血，凉血化療；白巧养肝柔肝；绞股蓝、红景天、虎杖、茵陈、巧《等清热解毒一、化湿巧浊。故舒肝驱毒方的开发和应用空间有待进步挖掘。硏究目

6、的研究舒肝驱毒方对ＨＳＣ的活化增殖及相关细胞因子网络的作用，Ｗ期揭示舒肝驱毒方抗纤维化的分子机制。研究方法１舒肝驱毒方对ＨＳＣ増殖及分泌ＥＣＭ的影响－１．１绘制ＨＳＣＴ６的自然生长曲线将液氮中冻存的Ｈ－ＳＣＴ６细胞株进行复苏，在恒温箱中，培养到细胞呈单层致密状－时，用膜蛋白酶消化之后，进行传代，在细胞生长稳定后，用ＭＴＴ的方法，绘制ＨＳＣＴ６的生长曲线。－１ＨＳＣ．２舒肝驱毒方对Ｔ６増殖的影响细胞培养方法同前面，分别加入舒肝驱毒方高剂量、中剂量、低剂量组，用ＭＴＴ法，检测细胞生长情况。

7、１．３舒肝驱毒方对ＥＣＭ合成的影响Ｉ－采用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）检测Ｉ、ＩＩＩ型胶原ｍＲＮＡ，酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫法（ＲＩＡ）分别检测Ｉ型胶原和透明质酸含量。２舒肝驱毒方对相关细胞因子网络的调节作用２－．１舒肝驱毒方对转化生长因子（ＴＧＦ）目１的抑制作用－－Ｔ６细胞ＴＧＦ－－－舒肝驱毒方对ＨＳＣ目ＩｍＲＮＡ的影响用ＲＴＰＣＲ检测，对ＨＳＣＴ６细胞ＴＧＦｓ－目１蛋白的影响用ＷｅｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测，对ＴＧＦ目１受体的影响采用流式细胞技术检测。－－ｍＲＮＡ舒肝驱毒方对ＴＧ

8、Ｆ目１的下游效应递质结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）的影响用ＲＴＰＣＲｎＨＳＣＴＧＦ－－检测。对Ａｇｌｌ刺激活化ｅＩｍＲＮＡ的抑制作用用ＲＴＰＣＲ检测，对Ａｎｇｌｌ刺激ＨＳＣ－活化碱性成纤维生长因子（ｂＦＧＦ）表达的抑制作用用免疫组化法检测。