六味抗衰饮对衰老模型大鼠线粒体dna含量及氧自由

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1、六味抗衰饮对衰老模型大鼠线粒体DNA含量及氧自由【摘要】目的：从肝细胞线粒体DNA（mtDNA）和氧自由基的角度，探讨六味抗衰饮延缓衰老的可行性和可能的作用机制，为临床提供实验依据.方法：将36只SD大鼠随机分成3组，每组12只，即青年对照组、衰老模型组、六味抗衰饮组.衰老模型组、六味抗衰饮组给予D半乳糖溶液造模，青年对照组给予生理盐水.六味抗衰饮组在造模的同时给予治疗，青年对照组和衰老模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续40d.检测肝细胞mtDNA的相对含量、血清SOD活性及MDA含量作比较.结果：六味抗衰饮能够降低衰老状态下大鼠肝细胞mtDNA相对含量及血清MDA含量，提高血清

2、SOD活性（P<0.05）.结论：六味抗衰饮组具有减轻D半乳糖诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤，保护肝细胞mtDNA，从多方面延缓机体衰老的作用.【关键词】衰老六味抗衰饮DNA线粒体氧自由基大鼠　　0引言　　中医学对衰老的观察和在延缓衰老方面的实践有着悠久的历史，历代医家多用补肾为主的方药来延缓衰老.在实践中我们发现，脏腑虚衰与痰浊、积滞、瘀血互为因果不断恶性循环，是导致衰老的重要因素［1-3］,据此立法创制了六味抗衰饮.在过去的研究中，我们观察到本方能明显改善老年患者倦怠健忘、头晕失眠、便秘等症状.本实验观察了六味抗衰饮对D半乳糖致衰大鼠肝细胞线粒体DNA及氧自由基的影响

3、.　　1材料和方法　　1.1材料SD大鼠36只，雌、雄各半，清洁级，鼠龄2tDNA提取所需试剂由贵阳医学院设备供应科和昆明绿盟试剂公司提供.SOD活性及血清MDA含量测定所需试剂盒由南京建成生物工程研究所提供.低温高速离心机（德国HeraeusBiofuge22R），紫外分光光度计（日本岛津UV365）.六味抗衰饮（红参10g，枸杞子15g，决明子15g，三七花10g，玫瑰花10g，绞股蓝20g）由贵阳医学院附属医院中药房提供，常规水煎两次，药液经纱布过滤后混合并浓缩至1g生药/mL，4℃保存.　　1.2方法　　1.2.1衰老动物模型建立［1］及中药治疗将实验大鼠随机分成3组，每

4、组12只，即青年对照组、衰老模型组、六味抗衰饮组.将大鼠适应性喂养1g/（kg·d），青年对照组每日皮下注射等量生理盐水1次，连续40d.六味抗衰饮组在造模的同时按每日1.5g/100g灌胃给药，青年对照组和衰老模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续40d.　　1.2.2血清及标本制备实验40d时各组动物禁食过夜，将大鼠固定好，剪开腹股沟动脉处皮毛，局部消毒，分离并剪断腹股沟动脉，取血3mL，3000r/min，离心10min，吸取血清用于SOD活性及MDA含量测定.采血后，断颈处死大鼠，立即剖腹取出肝脏，剥离干净、生理盐水冲洗、滤纸吸干、液氮冻存（-196℃）备用，用于测定mtDNA

5、含量.　　1.2.3肝细胞mtDNA含量检测［2］采用碱变性法提取肝细胞mtDNA,采用紫外分光光度法测定其含量.　　1.2.4血清氧化指标检测按试剂盒所述方法测定大鼠血清SOD活性、MDA含量.　　统计学处理：实验数据均x±s表示，用SPSS11.5统计软件进行统计分析，均数比较采用方差分析及LSDt检验，P<0.05为有统计学意义.　　2结果　　2.1大鼠肝细胞mtDNA相对含量的变化造模40d后，衰老模型组与青年对照组比较，肝细胞mtDNA相对含量升高，差异有统计学意义（P<0.05）；六味抗衰饮与衰老模型组比较，肝细胞mtDNA相对含量降低，差异有统计学意义（

6、P<0.05，表1）.　　2.2大鼠血清SOD活性、MDA含量变化造模40d后，衰老模型组与青年对照组比较，血清SOD活性明显降低，血清MDA含量升高，差异有统计学意义（P<0.05）；六味抗衰饮组与衰老模型组比较，血清SOD活性明显升高，血清MDA含量降低，差异有统计学意义（P<0.05，表1）.　　表1大鼠肝细胞mtDNA相对含量和血清SOD活性、MDA含量变化（略）　　aP<0.05vs青年对照；cP<0.05vs衰老模型.　　3讨论　　衰老涉及机体的多个系统和器官，是一个多基因、多因素参与的复杂过程.近年来，“衰老线粒体学说”已逐渐成为衰老理论

7、的研究热点［3-4］,自1989年Linnane等提出线粒体衰老假说，人们就开始关注线粒体DNA与衰老关系的研究.体细胞mtDNA裸露于基质，缺乏结合蛋白的保护，最易受伤害发生突变，mtDNA突变导致翻译多肽链错误，由此可引起线粒体膜结构和功能损伤，使呼吸链功能受损，是机体衰老的重要原因之一.但是，以往的研究大都关于突变，与年龄增长相关的mtDNA含量的变化报道较少.本研究结果表明，衰老模型组大鼠肝细胞mtDNA的含量明显高于青年对照组（P<0.05），由此推测