cox-2抑制剂(塞来昔布)对尿毒症腹膜透析大鼠淋巴管形成及腹膜功能影响

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1、摘要COX．2抑制剂(塞来昔布)对尿毒症腹膜透析大鼠淋巴管形成及腹膜功能的影响硕士研究生靳云凤导师赵占正郑州大学第一附属医院肾脏内科河南·郑州450052摘要背景和目的腹膜透析(peritonealdialysis，PD)因其具有居家操作方便、血源性疾病感染性小、花费少、．心血管事件发生率较低、保存患者尿量、保护残余肾功能等优点成为尿毒症患者的首选治疗方法，但随着透析时间的延长，患者的腹膜功能将逐渐丧失，超滤量将逐渐减少，直至超滤衰竭(ultrafiltrationfailure，UFF)的发生

2、。腹膜血管表面积的增大及问质淋巴系统回吸收增多是超滤衰竭发生的主要原因之一。新生血管(angiogenesis)致超滤衰竭在动物实验及临床研究中均已得到证实，并有广泛研究；但是淋巴管的形成(1ymphangiogenesis)对超滤衰竭的影响研究因缺乏特异性的标志物而相对滞后。随着近年一些淋巴管特异标记物的发现，推动了淋巴管新生的研究，目前其研究地位已等同于新生血管的研究。环氧化酶．2(COX．2)是花生四烯酸转化为前列腺素过程中的重要限速酶。近年来大量研究表明，COX-2是参与血管新生的重要因

3、子之一，其在静息状态下不表达或很少表达，但是在一些刺激因素如细胞因子、生长因子及肿瘤刺激因子等影响下其表达会明显升高。高表达COX．2可以通过其产物前列腺素E2(PGE2)与EPl结合，从而进一步激活Her-2／neu蛋白的酪氨酸激酶，引起VEGF-C的表达上调；采用基因沉默的方法，使COX-2的基因表达沉默，可以看到摘要VEGF．C的显著下调，说明在VEGF．C的合成过程中，COX．2起到了重要的调节作用。VEGF．C是机体重要的淋巴因子之一，其功能因结合受体的不同而有交叉。VEGF．C在体内

4、通过与VEGFR-2结合诱导血管内皮细胞的增生而引起血管生成作用，且较VEGF作用持久；同时VEGF．C与VEGFR．3的高亲和力作用，具有强大的淋巴管生成作用，使VEGF．C的促淋巴管生成作用成为主导，此已成为现在研究的热点。LYVE．1(1ymphaticvesselendothelialhyaluronanreceptor)且1]淋巴管内皮细胞透明质酸受体，由于特异性好，可准确区分毛细淋巴管与毛细血管，是比较可靠的淋巴管内皮细胞标志物。目前有研究证实在多种肿瘤组织中COX．2、VEGF．C

5、表达与微淋巴管的形成有关，且二者呈正相关。应用COX-2选择性抑制剂却可以抑制PGE2、PGl2及VEGF．CmRNA及蛋白水平的表达。尿毒症腹膜透析患者，因腹膜腔长期接触非生物相容性腹透液，致体内新生血管的生成及腹膜问质／淋巴回吸收系统增加与肿瘤的发生具有相似的生理病理过程，所以COX-2与VEGF．C二者在长期腹膜透析患者中也可能有一定的表达，并存在一定的相关性。所以我们构建尿毒症腹膜透析大鼠模型，以LYVE．1作为淋巴管的标记物，检测COX-2、VEGF．C的表达及应用COX-2抑制剂(塞

6、来昔布)后对其表达和对淋巴管生成以及腹膜功能的影响。方法清洁级sD大鼠均为雄性，共48只，体质量为180．2009。共分为5组：A：正常对照组(n_8只)，B：假手术组(n_8只)，C：尿毒症非腹透组(n-8只)，D：4．25％腹膜透析组(PD组，n=16只)，其中D组大鼠各选取8只分为DI(PD2周)和D2(PD4周)组。E：PD+塞来昔布干预组(n_8只)。A组大鼠不进行任何处理；B组大鼠行双侧肾包膜的剔除术：C组行5／6肾脏切除术：D、E组按3ml／1009BW从大鼠颈部腹透管注入4．25

7、％腹透液，保留时间2小时，规律腹膜透析；E组在规律腹透期间，每日每只按20mg／kgBW塞来昔布溶液灌胃，连续给药，直至腹透第28天结束。1)采用免疫组织化学方法检测大鼠腹膜组织中COX．2、VEGF．C蛋白表达及淋巴管密度(LVD)变化，并进行相关性分析。2)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组腹膜组织CoX．2、VEGF—C、LYVEⅡ摘要．1mRNA表达量，并分析各组间统计学差异。3)iE常组、PD2周、PD4周组以及E组大鼠处死前行腹膜平衡实验(PET)，准确计算净超滤量(UF)

8、、腹透液4h与0h糖比值(D／D0)；采用HE和Masson染色，光镜下观察不同透析时间壁层腹膜组织结构形态变化，分析塞来昔布应用对腹膜功能的影响。结果1．与正常组相比，假手术组大鼠腹膜组织COX-2和VEGF．CmRNA、蛋白表达差异无统计学意义门口>0．05)，尿毒症非腹透组、4．25％腹透组COX一2和VEGF．CmRNA、蛋白表达量均明显升高，差异有统计意义(均P<0．05)；与尿毒症非腹透组相比，4．25％腹透组COX．2和VEGF．CmRNA、蛋白表达显著升高，差异有统计学意义(尸<