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1、益肾填精、补钙壮骨中药复方对骨形成蛋白【摘要】目的研究益肾填精、补钙壮骨中药复方对骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导成骨信号转导机制的调控作用。方法将雌性P-4和Smad5、6mRNA表达。结果与模型空白组比较,中药复方各剂量组股骨骨密度显著升高(P＜0.01)；骨组织BMP-4、Smad5mRNA表达水平明显升高(P＜0.01),Smad6mRNA表达水平明显降低(P＜0.01)。结论益肾填精、补钙壮骨中药复方可明显上调BMP-4和Smad5mRNA表达,下调Smad6mRNA表达。【关键词】骨质疏松症；骨形成蛋白-4；信号转导；Smads蛋白Abstrac
2、t：ObjectiveTostudytheregulatingeffectofplementingcalciumandinvigoratingkidneymethodonthebonemorphogeicprotein-4(BMP-4)andsignaltransductionmechanism.MethodsFemaleD)offemoralboneinvitroeterandtheexpressionofBMP-4andSmad5,6mRNAerasechainreation(RT-PCR).Resultsparedodelrats,BMDoffemor
3、alboneinChinesemedicinegroups(highdose,middledose,load5mRNAincreasedobviously(P＜0.01),andtheexpressionofSmad6mRNAdecreasedobviously(P＜0.01).ConclusionsNanometercalciumandinvigoratingkidneyChinesemedicinecanincreasetheexpressionofBMP-4andSmad5mRNA,anddecreasetheexpressionofSmad6mRNA
4、.Keyorphogeicprotein-4；signaltransduction；Smadsprotein骨质疏松症是一种全身代谢性疾病,其病理机制十分复杂,是由多种细胞、激素和生长因子参与、互相交织而成的复杂网络。骨局部生长因子以自分泌和旁分泌的形式直接作用于骨细胞,能促进细胞增殖、分化及基质合成,对骨折修复的启动、发育、调控及塑形均有重要作用[1]。在众多骨生长因子中,骨形成蛋白(BMP)最受瞩目,它与骨诱导关系最为密切。在BMPs诱导骨形成过程中,BMP-Smad信号转导通路是最主要的信号通路。本研究通过检测去卵巢大鼠BMP-4及其受体调节性Smad
5、5、抑制性Smad6信号转导因子的基因表达变化,探讨益肾填精、补钙壮骨中药复方对BMPs诱导成骨信号转导机制的调控作用。现报道如下。 1实验材料 1.1动物雌性arker(TaKaRa公司),BMP-4,Smad5、6,β-actin引物(由TaKaRa公司合成),TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0试剂盒(TaKaRa公司)。 1.3仪器XR-36型双能X线骨密度仪(美国,NORLAND),BiometraPCR扩增仪(德国),DU640核酸蛋白分析仪(美国,Beckman),ChemiImager5500凝胶电泳成像分析系统(美国
6、,AlphaInnotech)。 1.4药物益肾填精、补钙壮骨中药复方制备：取长山岛大连湾牡蛎,洗净,晒干。采用纳米制备技术粉碎,最终平均粒径达到780nm左右,小于100nm的粒径占10%左右。在制备过程中采取封闭和在线监测等措施避免颗粒污染和保证合适的颗粒尺寸分布。所得牡蛎钙微粒与补肾中药(鹿茸等)微粉按照1∶1的比例混合,即得本实验用中药复方。牡蛎碳酸钙咀嚼片(东盛科技启东盖天力制药股份有限公司,国药准字：H32025394)。骨疏康颗粒(东港市康辰制药有限公司,国药准字：ZF20000347)。 2实验方法 2.1分组及造模将实验动物按体重分层
7、随机分为7组：正常组、模型空白组、牡蛎钙补肾中药复方低剂量组、牡蛎钙补肾中药复方中剂量组、牡蛎钙补肾中药复方高剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组(以下简称为正常组、模空组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、骨疏康组、牡蛎碳酸钙组),每组15只。除正常组外,余者进行造模处理,大鼠经腹腔注射盐酸氯胺酮0.2mL/250g进行麻醉,将之以俯卧姿势固定于自制手术架上,从大鼠髂嵴顶部外上方1cm左右,腰椎骶棘肌两侧入路切除大鼠双侧卵巢,术后肌肉注射青霉素0.4mL/250g,连续3d。 2.2给药造模10d后开始给药。实验低剂量组给药量为每日0.7g/
8、kg,实验中剂量组为每日2.1g/kg,实验高剂量组
