高通量血液滤过对老年脓毒症患者外周血髓样细胞触发

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1、高通量血液滤过对老年脓毒症患者外周血髓样细胞触发【关键词】脓毒症;高通量血液滤过;髓样细胞触发受体1;肿瘤坏死因子α;白介素6脓毒症是由微生物侵入人体而诱发的过度全身炎症反应，老年人(≥60岁)由于其器官老化、功能低下及合并多种慢性疾病，在某些诱因激发下极易发生脓毒性休克和多脏器功能障碍综合征，病死率高达50%〔1〕。近年来，高通量血液滤过(HVHF)在老年脓毒症、脓毒性休克、多脏器功能障碍综合征治疗中取得显著疗效，但其作用机制仍存较大争议。以往研究主要集中在HVHF对各种致病因子的清除〔2〕，但已

2、有研究证实HVHF治疗脓毒症的效果与清除炎症因子的效率之间无任何关联。髓样细胞触发受体1(TREM1)是由Bounchon等〔3〕在2000年新发现的一种免疫球蛋白超家族，是老年感染性疾病中炎症的激发和级联放大的关键介质，能增强炎症反应对机体的影响。因此，笔者观察了HVHF对老年脓毒症患者外周血单核细胞TREM1表达的影响，并对治疗后的老年脓毒症患者外周血单核细胞对内毒素刺激反应性进行观察。　　1资料与方法　　1.1一般资料2007年3月至2009年8月收治于绍兴市人民医院ICU科老年脓毒症患者20

3、例。10例在早期液体复苏、抗感染、强化血糖控制、脏器支持等综合治疗措施基础上，辅以HVHF治疗，男8例，女2例，年龄54～89(平均71.72±15.32)岁，急性生理和慢性健康(APACHEⅡ)评分12.24±3.59;HVHF参数设置：连续性静脉血液滤过(CVVH)前稀释法，通路为股静脉留置双腔导管，血流速度250ml/min，置换量6L/h。使用百特BM25血滤机。置换液为南京军区总医院配方。滤器为聚碳酸酯(AN69)膜，24h更换一次，持续72h。另10例患者(男8例，女2例，平均年龄72.01±

4、13.57岁，APACHEⅡ评分12.97±3.03)为与HVHF组配对的性别、年龄和APACHEⅡ评分相近，因经济原因未能行HVHF治疗而其余治疗措施相同的老年脓毒症患者。10例健康体检老年人作为健康对照。　　1.2入选标准APACHEII评分≥8分;年龄≥60岁，脓毒症诊断符合：凡临床上具有细菌学证据或高度可疑的感染，并符合以下前四条中的两条即可诊断为脓毒症：①体温>38℃或<35.6℃;②心率>90次/min;呼吸频率>20次/min或需要机械通气;③顽固性低血压(液体复苏≥

5、500ml，收缩压<90mmHg);④12h内出现至少以下一个脏器功能不全表现：神志改变;低氧血症(PaO2/FiO2<280);乳酸高于正常水平或代酸;少尿(尿量<0.5ml·kg-1·h-1);弥漫性血管内凝血(DIC)表现。　　1.3体外单核细胞培养及处理HVHF组和配对组治疗72h后抽取静脉血5ml，以枸橼酸钠抗凝，用Ficollhypzue细胞分离液(美国Pharmacia公司)分离外周血单核细胞。调整细胞数后置于48孔悬浮细胞培养板中，用含10%胎牛血清的RPMI1640

6、在37℃、5%CO2孵育箱中体外培养。孵育6h后加入10U/L内毒素(LPS)(美国BD公司)刺激，在孵育48h后以1500r/min4℃离心收集上清液，-80℃冰箱保存。另10名健康对照者抽血予同样操作。　　1.4ELISA法测定肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素(IL6)TNFα和IL6ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，实验按照说明书进行。　　1.5RTPCR检测外周血单核细胞TREM1mRNA表达HVHF组和配对组治疗0、72h时相点抽取静脉血5ml，并以枸橼酸钠抗凝。用Fic

7、ollhypzue细胞分离液(美国Pharmacia公司)分离外周血单核细胞。用Trizol试剂(美国GIBCO公司)提取细胞总RNA。按常规方法建立RTPCR反应体系和反应条件，采用Promega公司试剂盒，以βactin的扩增作为内参照，引物序列(TREM1：正义链：5′CGGGATCCTAGTGCACAGGAAGGATG3′，反义链：5′GCTCTAGAGGACATTCTCGTGGGTTCGT3′;βactin：正义链：5′TCACCCACACTGTGCCCATCTACGA3′

8、，反义链：5′CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG3′)由上海申友公司合成。扩增产物取每个反应体系10μl于非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，电泳结果与βactin的电泳结果相对照，采用凝胶图像处理系统(GIS)分析软件定量分析，计算TREM1与βactin光密度值。另测定10例健康志愿者。　　1.6统计学分析测定结果采用SPSS11.5软件包进行统计学处理,数据均用x±s表示，采用单因素方差分析。　　2结果