晚期糖基化终产物对高糖诱导nrk52e细胞的转

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1、晚期糖基化终产物对高糖诱导NRK52E细胞的转【摘要】目的：探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK52E的转分化干预作用。方法：大鼠肾小管导管上皮细胞株设空白组（不给葡萄糖）、高糖组（25mmol/L葡萄糖）、AGEs干预组（100mg/LAGEs）、高糖AGEs干预组（100mg/LAGEs+25mmol/L葡萄糖），培养72h后，用MP2）、α平滑肌肌动蛋白（αSMA）及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK52E细胞的表达，活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果：高浓度葡萄糖上调TGFβ1、Ⅰ型胶原

2、、MMP2、αSMA以及PTHrP表达，AGEs显著上调高浓度葡萄糖状态下TGFβ1、Ⅰ型胶原、MMP2、αSMA和PTHrP表达，提高ROS含量。结论：AGEs可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。【关键词】糖基化终产物，高级；NRK52E细胞；葡萄糖；受体-转化生长因子β；胶原I型；基质金属蛋白酶；肌动蛋白类；甲状旁腺激素肽（1-34）　　［Abstract］Objective:Tostudytheinterventioneffectofadvancedglycationendproducts(AGEs)onhyperglycemiainduc

3、edtransdifferentiationinNRK52Ecells.Methods:FourgroupsofNRK52Ecellsmol/Lofglucose),AGEstreatedgroup(groupAGE,given100mg/LofAGEs),andAGEsplushighglucosetreatedgroup(groupHGAGE,given100mg/LofAGEsplus25mmol/Lofglucose),andMP2),smoothmuscleactinα(αSMA),andparathyroidhormonerelatedpeptid

4、e(PTHrP)inthesecellsafter72hofreaction.Activeoxygen(ROS)contentsiainNRK52Ecells.　　［Keyinggroatrixmatalloproteinases;actins;teriparatide　　晚期糖基化终产物（AGEs）在糖尿病并发症的发生、发展中起着重要的作用。肾小管上皮细胞转分化是肾脏纤维化的重要病理基础，研究发现，肾脏纤维化是糖尿病肾病预后转归的主要影响因素[1]，但糖尿病对肾小管导管上皮细胞的影响研究并不清晰。2009年4～7月用AGEs作用在高葡萄糖状态下大鼠肾小管导管上皮细胞

5、株NRK52E中，观察调控肾小管导管上皮细胞转分化的转化因子β1（TGFβ1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（αSMA）以及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）的表达，以阐明AGEs与高糖条件对肾小管导管上皮细胞转分化的影响。　　1材料和方法　　1.1细胞培养　　大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK52E购自中科院细胞库，培养基DMEM培养液（美国GIBCO公司），加入10ml进口胎牛血清（BSA）（Sigma，USA）、1ml双抗（青、链霉素各100单位/ml）、1mmol/L乙二胺四乙酸。每周传代2～3次。　　1.2AGEs制备、纯化及鉴定　　取

6、50g/LBSA及0.5mmol/LD-葡萄糖溶于0.2mmol/L的缓冲液中，加入蛋白抑制剂（1.5mmol/L苯甲磺酰氟及0.5mmol/L乙烯二胺四乙酸钠），0.22μm滤器过滤，37℃培养箱孵育90d。AGEs采用AGEsBSA荧光光谱扫描鉴定，AGEsBSA激发高峰位于360nm，发射高峰位于430nm，最终浓度为90.52U/mg。　　1.3实验分组与处理　　分4组：空白对照组（control）为无糖培养基，高糖组含25mmol/L葡萄糖DMEM培养基，AGEs干预组在无糖的DMEM培养基中应用100mg/LAGEs干预，高糖AGEs干预组在25mmol

7、/L葡萄糖培养基中应用100mg/LAGEs干预。所有分组均在37℃，5%CO2条件下培养72h，每孔细胞均为每24h换液1次。　　1.4arker一起上样,经分离胶和浓缩胶进行聚丙烯酰胺胶凝体电泳电离，后将蛋白质电转印到转印膜聚偏二氟乙烯（PVDF膜）上，将膜放入含100g/L脱脂奶粉的TBST中封闭，4℃过夜，然后与一抗（PTHrP、Ⅰ型胶原均购置美国Santacruz公司，TGFβ1、MMP2购置于英国ABCam公司，αSMA购置于美国Dako公司）分别按1∶100、1∶75、1∶125、1∶75、1∶50的比例室温孵育90mi