解毒通络调肝散对胰岛素抵抗大鼠肝脏nfκb及mcp1表达的影响

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1、解毒通络调肝散对胰岛素抵抗大鼠肝脏NFκB及MCP1表达的影响【摘要】目的观察解毒通络调肝散对糖尿病(DM)胰岛素抵抗(IR)模型大鼠肝脏中核因子(NF)κB及单核细胞趋化蛋白(MCP)1表达的影响。方法采用高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)诱导DMIR大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、吡咯列酮组和解毒通络调肝组。给药8onocytechemoattractantprotein(MCP)1ofliverininsulinresistant(IR)rats.MethodsIRmodelratsinducedbyhighfatandgluco

2、sefoodandSTZlydividedintomodel，metformin，pioglitazone，andJDTLTGSgroups.After8aceuticalmechanismsmightbecloselyrelatedodelgroupliver，andinhibitingtheinflammatorypathogenesisinliver.　　【Keyoattractantprotein(MCP)1　　胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)的重要发病机制之一，但其具体的病理基础较为复杂，国内已有中医药防治IR的临床及试验报道。前期工作表明〔

3、1〕，解毒通络调肝散能改善实验动物IR，为进一步探讨其改善IR的作用机制，本实验观察了解毒通络调肝散对实验性DM大鼠肝组织核因子κB(NFκB)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)及MCP1mRNA表达的影响，探讨肝组织NFκB与MCP1途径与T2DM、IR之间的关系。　　1材料与方法　　1.1实验动物及分组清洁级8周龄雄性模型组52只。正常对照组给予基础饲料，模型组给予高热量饲料。4g/kg，于注射STZ1mol/L和120min血糖>11.1mmol/L为DM，具备上述一条为糖耐量减低(IGT)〔2〕。取DM或IGT模型组动物为实验对象。将造模

4、成功大鼠48只按血糖峰值分层，随机分为模型组(n=12)，中药组(n=12)，二甲双胍组(n=12)，吡格列酮组(n=12)。3个治疗组分别每日定时灌服解毒通络调肝散悬混液5g·kg-1·d-1、二甲双胍水溶液0.5g·kg-1·d-1、吡格列酮悬混液5mg·kg-1·d-1，动物自由进食饮水，正常对照组喂普通饲料，其他组喂高热量饲料。治疗周期为8a公司;末端全血葡萄糖测试条：北京怡成生物电子技术有限公司。胰岛素放免试剂盒购自北京东亚生物技术有限公司。兔抗大鼠NFκB、MCP1多克隆抗体购自武汉博士德公司。　　1.3检测指标及方法　　1.3.1生化指标的检测血

5、糖：怡成血糖仪检测;血清胰岛素：磁酶免分析仪I(美国BioRad)检测;胰岛素敏感指数(ISI)：Ln(1/空腹血糖×空腹胰岛素)。　　1.3.2肝组织NFκBp65、MCP1蛋白表达测定采用免疫组织化学SP法检测。一抗分别为兔抗大鼠NFκBp65(工作浓度1∶100)，MCP1多抗(工作浓度：1∶100);二抗均为山羊抗兔IgG，生物素标记来自抗兔的辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素SP试剂盒。严格按试剂盒说明书进行。　　1.3.3免疫组化染色半定量评分所有切片均由有经验的病理科医师盲法阅片作出诊断，每张切片观察5个×400视野。结果评定标准：着色程度：不

6、着色者为0分，着色淡者为1分，中等着色为2分，着色深者为3分。着色细胞阳性范围：无着色0分，着色阳性细胞小于1/3为1分，着色阳性细胞1/3～1/2为2分，着色阳性细胞大于1/2为3分。将每张切片着色程度与着色细胞阳性范围得分各自相加为其最后计分。　　1.3.4肝组织MCP1mRNA表达测定按Trizol试剂说明书。根据文献〔3〕合成MCP1寡核苷酸(PCR)引物。MCP1引物序列：上游5＇CACCTGCTGCTACTCATTCACT3＇;下游5＇GTTCTCTGTCATACTGGTCACTTC3＇。GAPDH引物序列：上游5＇ACCACAGTCC

7、ATGCCATCAC3＇;下游5＇TCCACCACCCTGTTGCTGTA3＇。引物由北京鼎国生物技术发展公司合成。扩增条件为：94℃预变性2min后进入如下循环：94℃→45s，55℃→45s，72℃→45s，循环数为30个，最后于72℃延伸10min。扩增的MCP1长度为349bp，GAPDH长度为450bp。扩增产物用凝胶成像分析系统进行紫外光成像分析，以GAPDH密度作为参考定量标准，数值以两者之吸光度(Int)×面积(Pix)比值表示，以对照组的比值作为标准1.0，计算MCP1基因相对表达量。　　1.4统计学处理数据以x±s表示，采用SPSS1

8、3.0软件