survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及

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1、Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及【关键词】蛋白　　ExpressionofsurvivinproteinsinrecoveryofmicespermatogenesisanditscorrelationcellapoptosisHUChuanYi　　【Abstract】AIM:Toexploretheexpressionofantiapoptoticproteinssurvivininthetestistissueanditscorrelationcellsapoptosis.METHODS:AdultKunmingmiceg/kgbodyodels

2、intheprocessofspermatogenesisrecovery.TestesmunohistochemistrySPmethodandthegermcellapoptosisissionelectronmicroscopeandterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)technique.RESULTS:Survivinostlyexpressedintheleydigcells,secondaryspermatocytesandspermatoblasts.

3、Thegermcellapoptosismainlyoccurredinprimaryspermatocytesandroundspermatoblasts.Survivinexpressioncellapoptosis(r=-0.784,P<0.01).CONCLUSION:Survivininducedinhibitionofapoptosismayparticipateinthebalanceofapoptosisandthusplaysanimportantroleinthenormalspermatogenesis.　　【Keycells　　【摘要】

4、目的:探讨新的凋亡相关基因survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系.方法:间隔24d两次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型，第2次给药后随机分为1，2，3，4，6，8，10cells,Gc）的增殖和自发性凋亡等过程，在正常的精子发生过程中，Gc的增殖和凋亡保持一定的平衡状态.Survivin是近年来分离出的凋亡抑制基因家族中的新成员，在调控细胞周期和抑制细胞凋亡中可能起重要作用.我们通过对survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达变化规律及其与Gc凋亡的关系，试图阐明survivin对小鼠Gc凋亡的调控作用，以期能为男性生

5、育的临床研究提供理论及动物实验的依据.　　1材料和方法　　1.1动物模型的建立和分组昆明雄性2~3mo龄小白鼠56只（由湖北省医学科学研究院实验动物中心提供），体质量35~55g，按标准饲养方法喂养.间隔24d两次腹腔注射白消安（德国Sigma公司产品），每次剂量为10mg/kg，建立小鼠精子再生的动物模型.模型建立后随机分为7组，分别为第2次用药后第1,2,3,4,6,8,10厚连续切片，分别行survivin蛋白免疫组化和细胞凋亡检测.　　1.2方法　　1.2.1电镜样品的制备新鲜睾丸组织1mm×1mm×1mm,置于25mL/L的戊二醛预固定24h，PBS清洗后

6、转至10g/L的锇酸中固定2h，逐级丙酮脱水，Epon812包埋，超薄切片机切片，日立H600电镜观察.　　1.2.2免疫组化采用超高敏SP法.一抗为兔抗人survivinpAb(1∶100)，二抗为羊抗兔IgG(1∶120)，以上抗体及SP试剂盒均购自福州迈新公司.具体操作按说明书进行，以该公司提供的阳性片作为阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照.　　1.2.3检测细胞凋亡采用DNA原位末端标记(TUNEL法).TUNEL试剂盒为德国宝灵曼公司产品，检测程序参照试剂盒说明书，方法简略为：常规脱蜡入水，20mg/L蛋白酶K37℃消化15min，30mL/LH2O

7、2阻断内源性过氧化物酶10min，1∶10小牛血清封闭非特异性反应，滴加末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)反应液，室温孵育60min，DAB显色.以乳腺癌标本作为阳性对照，以PBS液代替TdT反应液作为阴性对照.　　1.2．4Survivin染色图像分析及数据处理组织切片中胞质染为黄至棕黄色者为阳性细胞标志.每张切片随机选取5个视野，每个视野随机选取20个阳性细胞胞体，输入图像分析仪（TJY400真彩色细胞图像分析仪），对所选阳性细胞的灰度值进行测量，求出每组阳性细胞胞体的平均灰度值.　　1.2．5凋亡细胞计数细胞核上有黄至棕色颗粒着色为阳性标志.随机观察5~10曲