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时间:2018-11-02
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1、PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞【摘要】目的探讨卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)联合钙离子载体(CI)诱导K562细胞向树突状细胞(DC)分化的作用。方法对数生长期的K562细胞在含PMA和CI的培养液中培养96h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞表型,用MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖的能力。结果PMA联合CI组细胞形态发生明显变化,表面出现许多细小的突起,细胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLADR和CD1a表达上调,并且可以刺激淋巴细胞的增殖反应。结论PMA联合CI可以有效地使K562细胞向DC分化。【关键词】K562细胞树突细胞十
2、四酰佛波乙酯钙通道离子载体ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofPMA(phorbolmyristateacetate)andcalciumionophore(CI)ininducingthedifferentiationofleukemiacelllineK562intoactivateddendriticcells(DC).MethodsK562cellsonmediumcontainingCI(A23187)andPMAfor96h.Thecellmorphologyicroscopeandtheelectronicmicroscope.Th
3、eviabilityrateofK562cellsculturedineachgroupinedbythetrypanbluestaining.Theimmunologicphenotypesetry.Theproliferationreactionoflymphocytecellsetry.ResultsAfter96htreatmentl)andPMA(10μg/mL),thecellsexhibitedthecharacteristicDCmorphology,CD83,CD86,CD80,CD40andHLADR,CD1aexpressionulatetheprolifera
4、tionofallogeneicTcells.ConclusionCIinbinationchannels;ionophores福建医科大学学报2008年7月第42卷第4期曾晓明等:PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化树突状细胞(DC)是体内最强的抗原提呈细胞(APC),于髓系祖细胞。在白血病的细胞中,DC的祖细胞和白血病细胞同样于骨髓造血干细胞,因此可以刺激原始细胞分化成DC,直接呈递完整的白血病抗原,从而刺激T细胞产生抗肿瘤效应[1]。笔者观察了卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbolmyristateacetate,PMA)联合钙离子载体(calciumionorph
5、ore,CI)诱导K562细胞向DC分化的作用,探讨运用细胞株进行抗白血病免疫治疗的可行性。 1材料与方法 1.1材料 K562细胞株由福建医科大学药理学研究所馈赠。CI(A23187)、PMA为Sigma公司产品。RPMI1640干粉为美国Gibco公司产品。胎牛血清(FCS)为杭州四季青生物制品公司产品。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗HLADR、CD80单抗,PE标记的抗CD86,CD83,CD40和CD1a单抗及同亚型对照抗体(鼠抗人),均为美国eBioscience公司产品。丝裂霉素C为上海Roche公司产品。6孔培养板、96孔培养板均为Coasta公司产品。L谷
6、氨酰胺、MTT及台盼蓝制剂为厦门泰京生物工程有限公司产品,人淋巴细胞分离液为天津市灏洋生物制品科技有限责任公司产品。 1.2方法 1.2.1K562细胞培养及形态观察 (1)取对数生长期的K562细胞,以完全RPMI1640培养基(加入10%FCS,10mmol/LL谷氨酰胺)悬浮,以1×106mL-1接种于6孔板中,每孔2mL,分4组。PMA+CI组:加入PMA和CI,使PMA最终浓度为10ng/mL,CI最终浓度为375ng/mL;PMA组:只加入PMA,PMA最终浓度为10ng/mL;CI组:只加入CI,CI最终浓度为375ng/mL;对照组:只加培养基。每组细胞为一板(
7、n=6),37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,隔天半液换量。实验组(包括PMA+CI组、PMA组及CI组)另外加入半量新鲜试剂,对照组只补充新鲜培养基。培养96h后收获细胞。(2)形态观察。收获4组细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态。(3)细胞活率测定。收获各实验组的K562细胞,按台盼蓝1滴、K562细胞9滴的比例混合均匀,<30s滴于细胞计数板上,显微镜下计数。计算细胞活率=不染色细胞/(染色细胞+不染色细胞)×100%
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